في عمليات تحليل الأحماض الأمينية ، غالبًا ما يكون من الضروري فصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الكربوكسيلية للحصول على نتائج دقيقة وموثوقة. الأحماض الأمينية والأحماض الكربوكسيلية لها خصائص كيميائية متشابهة ، مما يجعل فصلها صعبًا.
فصل الحمض الأميني عن الحمض الكربوكسيلي
إحدى الطرق الشائعة الاستخدام هي كروماتوغرافيا التبادل الأيوني. في هذه التقنية يتم استخدام دعامة صلبة بخصائص التبادل الأيوني لفصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الكربوكسيلية بناءً على شحنتها. يتم عادةً تعبئة الدعامة الصلبة في عمود، ويتم تمرير طور متنقل يحتوي على محلول منظم من خلاله.
الأحماض الأمينية ، التي تكون مشحونة بشكل إيجابي بشكل عام عند الرقم الهيدروجيني للطور المتحرك ، ترتبط بالمواقع سالبة الشحنة على الدعامة الصلبة ، بينما تمر الأحماض الكربوكسيلية غير محتفظ بها. عن طريق ضبط درجة الحموضة وتركيز المخزن المؤقت ، يمكن إزالة الأحماض الأمينية بشكل انتقائي من العمود.
نهج آخر هو اللوني السائل عالي الأداء ذو الطور العكسي (RP-HPLC). تستخدم هذه الطريقة مرحلة ثابتة غير قطبية وطور متحرك قطبي لفصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الكربوكسيلية بناءً على قدرتها على مقاومة الماء. الأحماض الأمينية ، كونها أكثر قطبية ، يتم الاحتفاظ بها في المرحلة الثابتة لفترة أطول ، بينما يتم التخلص من الأحماض الكربوكسيلية في وقت مبكر. من خلال تحسين تكوين المرحلة المتنقلة وضبط معلمات العمود ، يمكن فصل الأحماض الأمينية بشكل فعال.
بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام تقنيات الاشتقاق لتحسين فصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الكربوكسيلية. يتضمن الاشتقاق تعديل المجموعات الوظيفية للتحليلات لتعزيز قابليتها للكشف وخصائص الفصل. على سبيل المثال ، يمكن اشتقاق الأحماض الأمينية بعلامة فلورية أو ماصة للأشعة فوق البنفسجية ، مما يزيد من حساسيتها وانتقائيتها أثناء الفصل باستخدام تقنيات الكروماتوغرافيا.
بشكل عام يمكن تحقيق فصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الكربوكسيلية في عمليات تحليل الأحماض الأمينية من خلال تقنيات مثل كروماتوغرافيا التبادل الأيوني و HPLC ذي المرحلة العكسية وطرق الاشتقاق. عندما يتم تحسين هذه التقنيات واستخدامها بشكل صحيح ، فإنها تتيح القياس الكمي الدقيق والدقيق للأحماض الأمينية الفردية ، وهو أمر بالغ الأهمية للتطبيقات المختلفة مثل توصيف البروتين والتشخيص السريري والتحليل الغذائي.
