كيفية تحضير الوسط الزراعي CLED Agar

الوسط الزراعي ((CLED Agar) Cystine-lactose-electrolyte-deficient agar) هو وسط تفاضلي يستخدم لعزل وتعداد البكتيريا من البول، وبشكل عام يستخدم لتشخيص الجراثيم الروتينية في المسالك البولية كوسط غير انتقائي قادر على دعم نمو معظم مسببات الأمراض البولية ويوفر مورفولوجيا مستعمرة متميزة، يعطي تمايزًا استعماريًا جيدا دون انتشار أنواع المتقلبة (Proteus species).

مكونات الوسط الزراعي CLED Agar

• 10.0 غ من اللاكتوز.

• 4.0غ من إنزيمات الهضمية من الجيلاتين (Enzymatic Digest of Gelatin).

• 4.0 غ من إنزيمات الهضمية من الكازين (Enzymatic Digest of Casein).

• 0.128 غ من سيستين (L-Cystine).

• 3.0 غ من مستخلص لحم البقر (Beef extract).

• 0.02 غ أزرق البروموثيمول (Bromothymol Blue).

• 15.0 غ من الأجار.

• ماء مقطر.

ملاحظة: الرقم الهيدروجيني (PH) يجب أن يكون 7.3 +/- 0.2.

مبدأ الوسط الزراعي CLED Agar

• يتكون (CLED) من هضم أنزيمي للكازين والجيلاتين ومستخلص لحم البقر الذي يوفر النيتروجين والفيتامينات والمعادن والأحماض الأمينية الضرورية للنمو.

• اللاكتوز هو كربوهيدرات قابلة للتخمر حيث توفر الكربون والطاقة، ستعمل الكائنات الحية القادرة عل تخمير اللاكتوز على خفض درجة الحموضة وتغيير لون الوسط من الأخضر إلى الأصفر.

تحضير الوسط الزراعي CLED Agar

• ارتداء القفازات وأدوات السلامة العامة وتعقيم مساحة العمل جيدًا.

• تعقيم الأدوات التي نريد استخدامها جيدًا.

• نأخذ 36 جرام من الوسط في لتر واحد من الماء المقطر.

• خلط المكونات جيدًا لكن برفق.

• تسخين المكونات مع التقليب المتكرر وندعها تغلي لمدة دقيقة واحدة فقط حتى تذوب تماماً.

• تعقيم بالبخار (Autoclave) لمدة 15 دقيقة عند 121 درجة مئوية.

• ندعها تبرد لتصل درجتها إلى 50 درجة مئوية.

• تخلط جيدًا ثم توزع في أطباق معقمة (Petri plate).

• عند تصلب الوسط يجب قلب الأطباق لتجنب الرطوبة الزائدة.

ملاحظة:تظهر استجابات الثقافة المختلفة (Various cultural responses) من قبل الكائنات الحية الدقيقة المختلفة على (CLED Agar) في الجو ودرجة حرارة المناسبة بعد 18-24 ساعة.

استخدامات الوسط الزراعي CLED

• يتم استخدام الوسط الزراعي (CLED) في زراعة البول الروتينية ويستخدم لنمو وتعداد الكائنات الحية التي تظهر في المسالك البولية.

• يساعد في التمايز بين اللاكتوز المخمر (lactose fermenter) واللاكتوز الغير مخمر (lactose non-fermenter).

• بيئة مناسبة جدا لعزل وحساب العديد من الكائنات الحية الدقيقة التي تنمو هوائيا مثل (Enterobacteriaceae)، (Pseudomonas) وغيرها من العصي غير المخمرة سالبة الجرام (non-fermenting Gram negative rods)،المكورات المعوية (Enterococci)، المكورات العنقودية (staphylococci) وغيرها الكثير من عينات البول.