ميديا CLED Agar المستخدمة في مختبر الميكروبيولوجي

مختبر الأحياء الدقيقة السريري:

تختلف العينات المرضية في مختبر الأحياء الدقيقة السريري، حيث يقوم مختبر الميكروبيولوجي على تشخيص العديد من العينات المرضية ناتجة عن الكائنات الحية الدقيقة المختلفة، وبسبب اختلاف أنواع العينات في مختبر الميكروبيولوجي يقوم المختبر على تحضير العديد من أنواع الميديا لتتناسب مع أنواع العينات المختلفة.

ومن الجدير بالذكر أن لكل عينة مرضية يسببها كائن حي دقيق مختلف لهذا السبب تتعدد حاجة هذه العينات لأنواع ميديا مختلف، حيث إنه لكل خلية ميكروبية ممرضة تحتاج إلى وسط وبيئة صناعية ومعايير نمو تختلف عن خلية ميكروبية ممرضة أخرى.

ما هي ميديا CLED Agar؟

ميديا (CLED Agar): هو إحدى أنواع الميديا يتم تحضيره صناعياً في مختبر الأحياء الدقيقة السريري، (CLED) وهو اختصار لمصطلح (Cystine-Lactose-Electrolyte-Deficient)، حيث إنه يشكل وسط بيئي صناعي تفاضلي (differential) يستخدم لنمو وعزل البكتيريا التي تسبب التهابات في المسالك البولية.

حيث يفضل استخدام هذا النوع من الميديا في مختبر الميكروبيولوجي لزراعة عينات البول (urine samples) عن الميديا (blood agar) وأيضاً ميديا (MacConkey agar)، وذلك لأن (CLED Agar) يدعم نمو جميع مسببات الأمراض والتهابات في المسالك البولية، كما يقوم على تفرقة بين المستعمرات البكتيرية التي تخمر اللاكتوز والتي لا تستطيع تخمير اللاكتوز.

مكونات ميديا CLED agar:

تختلف ميديا (CLED Agar) عن غيرها من أنواع الميديا في مكوناته الأساسية، ويوفر هذا الوسط البيئي الصناعي كافة معايير النمو سواء من ناحية توفر العناصر الغذائية أو توفر درجة الحموضة أو ما يعرف في مؤشر الهيدروجيني المناسب لنمو وتكاثر الكائنات الحية الدقيقة من أجل سهولة عزلها ودراسة العمليات الأيضية لها، ومن أهم مكونات (CLED Agar):

• ماء مقطر (distilled water).

• اللاكتوز (Lactose).

• الجلاتين (gelatin).

• كازين (casein).

• أنسجة حيوانية مهضومة.

• سيستين (L-Cystine).

• صبغة (Bromothymol Blue).

• أجار (Agar) صناعي ويكون على شكل باودر.

مبدأ عمل ميديا CLED Agar:

إن مكونات الأساسية (CLED Agar) هي اللاكتوز، الجلاتين، السيستين، الكازين، وبعض الفيتامينات والكربون التي توجد في الأنسجة الحيوانية المهضومة، حيث إن اللاكتوز هو مصدر طاقة للكائنات الحية القادرة على الاستفادة منه بآلية تخمير، ويستخدم الجلاتين والكازين والأنسجة الحيوانية المهضومة في توفير النيتروجين والفيتامينات والكربون من أجل توفير معايير نمو المناسب للبكتيريا.

إما بالنسبة للسيستين يوجد بعض أنواع البكتيريا تعتمد عليه في نموها وتكاثرها مثل البكتيريا القولونية، وتستخدم صبغة البرومثيمول الأزرق كمؤشر للأس الهيدروجيني (PH) للتمييز بين مخمرات اللاكتوز وغير المخمرة، حيث تعمل مخمرات اللاكتوز على خفض درجة الحموضة في الوسط عن طريق إنتاج الحمض والمخلفات العضوية بالتالي تؤدي إلى تغيير لون المؤشر من الأزرق إلى الأصفر، إما عندما لا يحدث تخمر للاكتوز يبقى اللون الأزرق.

طريقة تحضير ميديا CLED Agar:

• ارتداء القفازات والكمامات وتعقيم مساحة العمل بواسطة المطهرات الكيميائية.

• تعقيم كافة الأدوات والمعدات المستخدمة في تقنية تحضير الميديا.

• ضع الماء المقطر في قارورة زجاجية معقمة (Flask)، بحيث تكون كمية الماء تناسب كمية الميديا المراد تحضيرها.

• ضع القارورة الزجاجية على مصدر النار، وضع المحرك المغناطيسي في داخلها.

• ضع أجار المحضر صناعياً تدريجياً وببطء قبل إن يسخن الماء، رفع درجة حرارة النار تدريجياً.

• انتظر لمدة دقيقة حتى يبدأ المزيج في الغليان، خفض درجة الحراة تدريجياً حتى يتحول المزيج إلى الشكل النقي.

• ضع القارورة الزجاجية في الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

• عندما يبرد المزيج لحرارة تصل إلى 50 درجة مئوية، يتم صب الميديا في إطباق معقمة من (Petri plates).

• سجل على (Petri plates) تاريخ ووقت تحضير.

• ضع (Petri plates) في ثلاجة التخزين بعد إن يصل إلى درجة حرارة الغرفة، ويجب إن تتراوج درجة حرارة الثلاجة ما بين 2 إلى 6 درجة مئوية.

• تعقيم مساحة العمل بواسطة المطهرات الكيميائية، وتعقيم كافة الأدوات المستخدمة في عملية تحضير الميديا.

ضبط الجودة في تحضير ميديا CLED Agar:

• يجب اتباع قواعد السلامة العامة أثناء تحضير الميديا.

• التأكد من درجة حرارة الأوتوكلاف وثلاجات التخزين والحاضنات بشكل مستمر.

• التأكد من دقة عمل ميزان الحرارة المستخدم في قياس درجات الحرارة الميديا أثناء تحضيرها.

• التأكد من دقة عمليات التعقيم أثناء تحضير الميديا، في الإضافة من التأكد من مدى تعقيم الأدوات ومعدات.

• التأكد من تخزين الأجار في أماكن التخزين الصحيحة بعيداً عن أي مصادر تلوث أو رطوبة.

مزايا ميديا CLED Agar:

• يستخدم للتمييز الجيد للبكتيريا سالبة الجرام على أساس تخمر اللاكتوز وعدم تخمره وظهور المستعمرات البكتيرية.

• أقل تكلفة من الميديا (blood agar) وأيضاً ميديا (MacConkey agar).

• جميع أنواع البكتيريا التي تسبب التهاب في المسالك البولية تستطيع النمو وتكاثر داخلة.