اللوني السائل (LC) هو أسلوب تحليلي متعدد الاستخدامات يستخدم على نطاق واسع في تحليل العينات البيولوجية. إنه يوفر دقة عالية وحساسية وانتقائية، مما يجعله أداة لا غنى عنها في مختلف المجالات مثل الأدوية والتشخيص السريري والطب الشرعي والمراقبة البيئية.
تطبيق الكروماتوغرافيا السائلة في تحليل العينات الحيوية
- الخطوة الأولى في تحليل LC هي تحضير العينة. غالبًا ما تكون العينات البيولوجية عبارة عن مصفوفات معقدة تحتوي على مجموعة واسعة من المركبات. من الأهمية بمكان استخراج التحليلات المستهدفة وتنقيتها من مصفوفة العينة قبل التحليل. عادةً ما يتم استخدام تقنيات مثل استخلاص المرحلة الصلبة أو ترسيب البروتين لهذا الغرض.
- بعد ذلك ، يتم حقن العينة المحضرة في الكروماتوجراف السائل. تتكون أنظمة LC من مرحلة ثابتة (عمود) ومرحلة متحركة (مذيب). تتفاعل مكونات العينة بشكل مختلف مع المرحلة الثابتة بناءً على خصائصها الكيميائية ، مما يؤدي إلى الانفصال. يمكن استخدام أنواع مختلفة من أوضاع LC ، بما في ذلك الطور العكسي والطور العادي والتبادل الأيوني وكروماتوغرافيا استبعاد الحجم ، اعتمادًا على خصائص التحليل.
- أثناء الفصل ، يتدفق الطور المتحرك باستمرار عبر العمود ، حاملاً مكونات العينة. يتم الكشف عن المواد التحليلية الماصة باستخدام تقنيات الكشف المختلفة مثل الامتصاص المرئي للأشعة فوق البنفسجية أو التألق أو قياس الطيف الكتلي أو الكشف الكهروكيميائي. توفر هذه الكواشف معلومات كمية ونوعية حول التحليلات المنفصلة.
- يجب تحسين معلمات طريقة LC ، بما في ذلك نوع العمود وتكوين الطور المتحرك ومعدل التدفق وطول موجة الكشف ، لتحقيق الفصل الأمثل واكتشاف التحليلات المستهدفة. يتضمن تطوير الطريقة تباينًا منهجيًا لهذه المعلمات لتحقيق الدقة والحساسية اللونية المرغوبة.
بعد الفصل يتم إجراء تحليل البيانات باستخدام البرامج المناسبة. يعد تكامل الذروة وتوليد منحنى المعايرة وتقدير التحليلات خطوات أساسية في التحليل. يمكن تحديد وتأكيد المركبات المنفصلة عن طريق مقارنة أوقات الاستبقاء وأطياف الكتلة مع تلك الخاصة بالمعايير المرجعية.
في الختام يعتبر الفصل اللوني السائل تقنية تحليلية قوية لتحليل العينات البيولوجية. يوفر إمكانات فصل ممتازة ومتوافق مع مجموعة واسعة من أجهزة الكشف. باتباع الخطوات الموضحة يمكن للعلماء تطبيق كروماتوغرافيا سائلة بشكل فعال لدراسة الأنظمة البيولوجية المعقدة ، وتمكين التقدم في البحث الطبي وتطوير الأدوية ، والمجالات العلمية الأخرى.
