تعتبر عملية فصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الأخرى في تحليل الأحماض الأمينية أمرًا بالغ الأهمية لتحديد دقيق وتقدير الأحماض الأمينية الفردية في العينة. يستخدم تحليل الأحماض الأمينية على نطاق واسع في مختلف المجالات ، بما في ذلك الكيمياء الحيوية والتغذية والبحوث الصيدلانية.
كيفية فصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الأخرى
تحضير العينة: الخطوة الأولى هي تحضير العينة المحتوية على الأحماض الأمينية والأحماض الأخرى. قد يشمل ذلك استخراج وتنقية وتركيز المركبات المستهدفة. يمكن اشتقاق العينة من مصادر مختلفة ، مثل البروتينات أو الببتيدات أو السوائل البيولوجية.
التحلل المائي: بمجرد تحضير العينة ، يتم إجراء التحلل المائي لتفكيك البروتينات أو الببتيدات إلى أحماض أمينية فردية. تتضمن هذه العملية عادةً استخدام الحمض أو الإنزيمات لشق روابط الببتيد. سيحتوي الخليط الناتج على كل من الأحماض الأمينية والأحماض الأخرى المشتقة من العينة.
الاشتقاق: لفصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الأخرى ، يتم استخدام المشتقات بشكل شائع. يضاف كاشف اشتقاق إلى التحلل المائي ، والذي يتفاعل بشكل خاص مع الأحماض الأمينية لتكوين مشتقات مستقرة. تسمح هذه الخطوة بتحسين الحساسية ، والفصل المحسن ، والتوافق مع التقنية التحليلية المستخدمة في التحليل ، مثل اللوني السائل أو كروماتوغرافيا الغاز.
الفصل الكروماتوجرافي: يتم بعد ذلك تعريض الخليط المشتق للفصل الكروماتوجرافي. تُستخدم تقنيات الكروماتوغرافيا السائلة (LC) أو اللوني للغاز (GC) بشكل شائع ، اعتمادًا على المتطلبات المحددة للتحليل. يتحقق الفصل بناءً على الخصائص الفيزيائية والكيميائية لمشتقات الأحماض الأمينية ، مثل القطبية أو الحجم أو التطاير.
الاكتشاف والقياس الكمي: بعد الفصل ، يتم الكشف عن مشتقات الأحماض الأمينية الفردية وتحديد كميتها. يمكن استخدام تقنيات الكشف المختلفة ، بما في ذلك قياس الطيف الضوئي بالأشعة المرئية وفوق البنفسجية أو التألق أو قياس الطيف الكتلي. توفر هذه التقنيات قياسات دقيقة لتركيزات الأحماض الأمينية في العينة.
باتباع هذه الخطوات ، من الممكن فصل الأحماض الأمينية عن الأحماض الأخرى أثناء عملية تحليل الأحماض الأمينية. يسمح الفصل بتحديد دقيق وتقدير كمية الأحماض الأمينية الفردية ، مما يوفر معلومات قيمة لمجموعة واسعة من التطبيقات العلمية.
