الكروماتوغرافيا هي تقنية مستخدمة على نطاق واسع لفصل وتحليل المخاليط المعقدة من المركبات ، بما في ذلك الأحماض الأمينية. في عملية الفصل اللوني ، يمكن فصل الأحماض الأمينية المختلفة عن بعضها بناءً على خصائصها الفريدة ، مثل الحجم الجزيئي والقطبية والشحنة.
طرق فصل الأحماض الأمينية عن بعضها
- طريقة كروماتوغرافيا شائعة الاستخدام لفصل الأحماض الأمينية هي كروماتوغرافيا التبادل الأيوني. تستفيد هذه التقنية من الشحنات المختلفة التي تحملها الأحماض الأمينية عند درجة حموضة معينة.
- يتم استخدام راتينج التبادل الأيوني مع مجموعات وظيفية مشحونة كمرحلة ثابتة. عندما يتم تطبيق خليط الأحماض الأمينية على الراتينج ، فإن الأحماض الأمينية ذات الشحنة الموجبة الصافية ستتفاعل بقوة أكبر مع المجموعات الوظيفية سالبة الشحنة ، بينما تتفاعل الأحماض الأمينية ذات الشحنة السالبة الصافية بقوة أكبر مع المجموعات الوظيفية موجبة الشحنة. من خلال ضبط الأس الهيدروجيني والقوة الأيونية للمرحلة المتنقلة ، يمكن التصفية الانتقائية للأحماض الأمينية ، واحدة تلو الأخرى ، مما يؤدي إلى فصلها.
- طريقة أخرى مستخدمة لفصل الأحماض الأمينية هي الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC). يمكن أن يستخدم HPLC مختلف الأطوار الثابتة ، بما في ذلك أعمدة الطور العكسي ، والتي تستخدم بشكل شائع للمركبات الكارهة للماء مثل الأحماض الأمينية. في HPLC ذو الطور العكسي ، تكون المرحلة الثابتة غير قطبية ، والطور المتحرك قطبي. سوف تتفاعل الأحماض الأمينية ذات الكراهية المختلفة للماء بشكل مختلف مع المرحلة الثابتة ، مما يؤدي إلى فصلها بناءً على خصائصها الكارهة للماء.
- كروماتوغرافيا استبعاد الحجم (SEC) هي تقنية أخرى تستخدم لفصل الأحماض الأمينية بناءً على حجمها الجزيئي. في SEC ، يتم استخدام مرحلة ثابتة مسامية ، والتي تسمح للجزيئات الأصغر بدخول المسام ، مما يؤدي إلى وقت احتجاز أطول ، بينما تمر الجزيئات الأكبر عبر العمود بسرعة أكبر. من خلال اختيار مرحلة ثابتة مناسبة ذات حجم مسام مناسب ، يمكن فصل الأحماض الأمينية ذات الأحجام المختلفة عن بعضها البعض.
بشكل عام ، تعتمد عملية فصل الأحماض الأمينية المختلفة في الكروماتوغرافيا على استغلال خصائصها المميزة مثل الشحنة والقطبية والحجم. من خلال اختيار الطريقة اللونية المناسبة ، والمرحلة الثابتة ، وظروف الطور المتحرك ، يمكن للعلماء تحقيق فصل فعال وانتقائي للأحماض الأمينية ، مما يتيح تحديدها وتقديرها في الخلائط المعقدة.
