تقدم التجربة التي تتضمن تفاعل الصبغة مع الحمض النووي تقنية قوية لكشف وتحليل جزيئات الحمض النووي. تعتمد هذه الطريقة على الارتباط المحدد للأصباغ الفلورية بالحمض النووي ، مما يتيح للباحثين تصور وتحديد أجزاء الحمض النووي.
المواد المطلوبة للقيام بتجربة تفاعل الصبغة مع الحمض النووي
- صبغة الفلورسنت: يتم استخدام صبغة الفلورسنت المتخصصة، مثل بروميد إيثيديوم أو SYBR Green. تصدر هذه الأصباغ الضوء عند ارتباطها بالحمض النووي.
- عينة الحمض النووي: جزيئات الحمض النووي المستهدفة التي سيتم الكشف عنها ودراستها. يمكن أن تكون هذه من مصادر مختلفة ، مثل الخلايا أو المواد الجينية المستخرجة.
- جل الرحلان الكهربائي: مصفوفة هلامية ، غالبًا هلام الاغاروز ، تنتقل من خلالها شظايا الحمض النووي بناءً على حجمها أثناء الرحلان الكهربي.
- محلول الرحلان الكهربائي: محلول عازل موصل يسهل حركة شظايا الحمض النووي عبر الهلام.
الخطوات التجريبية للقيام بتجربة تفاعل الصبغة مع الحمض النووي
- تحضير الجل: تحضير هلام الاغاروز عن طريق خلط مسحوق الاغاروز مع محلول الرحلان الكهربي. سخني المزيج حتى يذوب ، ثم اسكبيه في صينية هلامية واتركيه يتماسك. إنشاء آبار في الجل لتحميل عينات الحمض النووي.
- تحميل الحمض النووي: قم بخلط عينات الحمض النووي بصبغة تحميل تحتوي على أصباغ تتبع وعوامل تغيير طبيعة. قم بتحميل هذه الخلائط في الآبار التي تم إنشاؤها في الجل.
- الرحلان الكهربائي: اغمر الهلام في غرفة رحلان كهربي مملوءة بمحلول فصل كهربائي. ضع مجالًا كهربائيًا عبر الجل. سوف تنتقل شظايا الحمض النووي عبر الهلام ، مع شظايا أصغر تتحرك أسرع من الأجزاء الأكبر.
- تلطيخ: بمجرد اكتمال الرحلان الكهربائي ، اغمر الجل في محلول يحتوي على صبغة الفلورسنت. تتداخل الصبغة بين أزواج قاعدة الحمض النووي ، وتنبعث منها الفلورة عند التعرض للأشعة فوق البنفسجية.
- تصور الأشعة فوق البنفسجية: ضع الجل الملون تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية. سوف تتألق نطاقات الحمض النووي ، ويمكن تصور مواقعها وتوثيقها. تتوافق كل فرقة مع جزء من الحمض النووي بحجم معين.
- التحليل: بمقارنة مسافات هجرة نطاقات الحمض النووي بسلالم الحمض النووي (مجموعة من أجزاء الحمض النووي المعروفة) ، يمكن للباحثين تحديد أحجام شظايا الحمض النووي في العينة.
تقدم تجربة تفاعل الصبغة طريقة موثوقة لتحليل شظايا الحمض النووي ، وهي حاسمة في تطبيقات مختلفة مثل بصمات الحمض النووي ، والبحوث الجينية ، وتشخيص الأمراض. باستخدام الأصباغ الفلورية والرحلان الكهربائي ، كشف العلماء الألغاز الجينية المخبأة داخل بنية الحمض النووي المعقدة.
