الصبغات المستخدمة في العينات الطفيلية

يعد الميكروسكوب (المجهر) أداة مهمة جداً في علم الميكروبيولوجي، وإن من أهم المشاكل التي يمكن مواجهتها عند رؤية ميكروب معين تحت الميكروسكوب هو شفافيته وعدم وضوح شكله الخارجي وتركيبه، لذلك لجأ العلماء لاستخدام العديد من الألوان والصبغات في العينات المخبرية بشكل عام  والعينات الميكروبية بشكل خاص تحديداً العينات الطفيلية.

الصبغة هي مواد عضوية تتكون من مجموعات ذرية مرتبطة بلون معين تسمى حامل الألوان  (chromophore) ومجموعات تربط المركبات الكيمائية ببعضها بعض في الصبغات تسمى ماسك اللون (auxochrome group).

أهمية الصبغات المستخدمة في العينات الطفيلية

إن أهمية صبغات العينات تحديداً العينات الميكروبية تكمن في زيادة وضوح وتباين شكل الخلية وتراكيبها الداخلية وبالتالي تحديد وتشخيص الأنواع المختلفة والأجناس المتشابهة.

أنواع الصبغات المستخدمة في العينات الميكروبية

يتم تصنيف الصبغات التي يتم استخدامها في عينات الميكروبيولوجي اعتماداً على:

1- الرقم الهيدروجيني (pH) ويتم تقسيم الصبغات إلى:

• الصبغات القاعدية: هي صبغات تحتوي على مواد قاعدية عضوية ملونة وتكون فيها حاملات اللون (Chromophores) تحمل الأيون الموجب تذوب في الماء أو في الكحول أو كلاهما ومن أمثلتها صبغة السفرانين (Safranin).

• الصبغات الحامضية:هي صبغات تحتوي على مواد حامضية عضوية ملونه تتحد مع قاعدة معدنية غير ملونة وتكون فيها  حاملات اللون (Chromophores) تحمل الأيون السالب وتذوب في الماء أو الكحول أو كلاهما ومن أمثلتها صبغة الأيوسين (Eosin).

• الصبغات المتعادلة: هي صبغات مركبة من صبغات حامضية وقاعدية وتكون فيها الأيونات الموجبة والسالبة حاوية على مجموعة من حاملات اللون (Chromophores) وتذوب هذه الصبغات عادة في الكحول وربما تذوب في الماء وكثيراً ما تكون محاليل غروية ومن أمثلتها الأحمر المتعادل (natural red).

2- عدد الصبغات المستخدمة ويتم تقسيمها إلى:

• الصبغات البسيطة (ٍSimple Stain): يتم استخدام نوع واحد من الصبغات وتعطي اللون نفسه لجميع الكائنات المجهرية، ويتم استخدامها لمشاهدة الشكل العام والترتيب والحجم للكائن المجهري مثل البكتيريا ومن الأمثلة على ها النوع من الصبغات صبغة الميثلين الأزرق (Methylene blue stain).

• الصبغات غير البسيطة (Differential Stain): يتم استخدام نوعين أو أكثر من الصبغات ويتم استخدامها لمشاهدة الحجم والشكل وترتيب الخلايا للكائن المجهري وتمييز الأنواع المختلفة من الخلايا والكائنات الدقيقة مثل صبغة غرام (Gram Stain).

الصبغات الطفيلية المستخدمة في العينات الطفيلية

تستخدم الصبغات في العديد من العينات الطفيلية مثل عينة الدم (blood film) أو البراز أو عينات الخزعات مثل خزعة العضلات وذلك لتحديد نوع الطفيل الذي تسبب بالمرض ومن هذه الصبغات:

1- صبغة كارمين Carmine Stain

• هي صبغة كيميائية تتكون من عنصر الألومنيوم واللون الأحمر الطبيعي (natural red)

• يتم استخدامها لتلوين النواة وتكشف عن أنواع الديدان الشريطية وطفيل الهيروفيتس غير المتجانس و الميتاجونيموس يوكوغاواي (Taenia Species, Heterophyes  heterophyes  and Metagonimus yokogawai).

2- صبغة حامضية Periodic Acid Schiff  stain

• تتكون من حمض وكاشف شيف.

• يتم استخدامها في العينات النسيجية وفي فحص الكثير من أنواع الفطريات.

• تكشف هذه الصبغة عن أنواع طفيليات الباراغونيموس وخصوصاً الباراغونيموس الويسترماني (Paragonimus westermani).

3- صبغة ثلاثي الألوان Trichrome stain

• هي صبغة تتكون من لونيين حمضيين أو أكثر  وتميز الأنسجة عن طريق تلوينها بألوان متباينة ويزيد هذا التباين الملامح المجهرية في الخلايا والأنسجة؛ مما يسهل رؤيتها عند النظر إليها من خلال المجهر.

• صبغة ثلاثي الألوان هي نوعين صبغة مالوري ثلاثية الألوان (Mallory’s trichrome stain) وتتكون من الأنيلين الأزرق (aniline blue) وحمض الفوشين (Acid fuchsin) واللون البرتقالي ج (orange G) وتستخدم للكشف عن الجزيئات الكبيرة للخلية كالسيتوبلازم وصبغة ميوسين ثلاثية الألوان (Masson’s trichrome)، وتتكون من محاليل عديدة مثل محلول كلوريد الحديد في حمض الهيدروكلوريك المخفف و محلول الهيماتوكسلين في الإيثانول ومحلول فيري سيانيد البوتاسيوم وغيرها وتستخدم لتلوين الخلية بأكملها.

• إن صبغة ثلاثي الألوان تستدم في الكشف عن أغلب أنواع الطفيليات وأجناسها في الأوليات مثل الأميبيات والبوغيات وغيرها.

4- الصبغة الحامضية السريعة Acid-Fast Stain

• هي صبغة يتم استخدام فيها أكثر من مادة وتتكون من الميثانول (Methanol) وكحول حامضي (Acid Alcohol) وحامض الكبريت (Sulfuric Acid) والملاكيت الأخضر (Malachite green) وإيثانول (Ethanol) ومركب (Kinyoun’s Carbol fuchsin).

• تستخدم لعينات البراز والبلغم وسائل الاثنا عشر والعصارة الصفراوية.

• تكشف عن الأنواع الطفيلية (Cryptosporidium, Cystoisospora, and Cyclospora).

5- صبغة جيمسا Giemsa stained

• هي عبارة عن خليط من الميثلين الأزرق (Methylene blue) والأيوسين (Eosin) والأزور ب (Azure B).

•  تستخدم لعينة فلم الدم (Blood film) وعينات نخاع العظم ويمكن استخدامها للمسحات المهبلية.

• تكشف عن الأنواع الطفيلية مثل طفيليات البلازموديوم والأوليات المثقبية والمشعرات المهبلية (Plasmodium Species, Trypanosoma Species , Trichomonas vaginalis).

6- صبغة الهيماتوكسيلين واليوسين  Hematoxylin and Eosin stain

• يتم اختصارها (H and E) وتتكون من مادة الهيمالم وهو مركب يتكون من أيونات الألومنيوم والهيماتوكسيلين المؤكسد وبالإضافة لليوسين.

• يتم استخدامها في العينات النسيجية والخزعات وهي من أكثر الصبغات استخداماً للكشف عن الطفيليات لسهولة استخدامها وتكلفتها القليلة.

• تكشف عن العديد من الطفيليات منها الأنكلستوما والفتاكة (Ancylostoma and Necator) وديدان الأسكارس (Ascaris lumbricoides) والبلانتيديوم القولوني (Balantidium coli) والديدان الدبوسية (Enterobius vermicularis) والديدان الشريطية القزمة (Hymenolepis diminuta)  وأنواع الليشمانيا (Leishmania) وأنواع البلهارسيا  (Schistosoma).

7- محلول اليود والسفرنين Iodine solution and Safranin

• هما عاملان تلوين مهمان جداً لإدخال الصبغات الأخرى في خلية الكائن المجهري ومنها الطفيليات، ويتم استخدامها في رؤية العينات مباشرة لأغلب أنواع الطفيليات حيث يحدد الشكل العام لخلية الطفيل ويمكن من خلالهما رؤية النواة.