تقنيات التركيز لعينات البراز

إن الفحص المجهري المباشر لعينة البراز هو الفحص الأكثر شيوعاً في مختبر الميكروبيولوجي للكشف عن الطفيليات والتعرف عليها، ويُستخدم لرؤية الطور الخضري المتحرك (Trophozoites)، ولكن لا يمكن رؤية أطوار طفيلية أخرى مثل الأكياس والبويضات واليرقات الموجودة بأعداد ضئيلة؛ ولذلك نحتاج لتقنيات تساعد رؤية هذه الأطوار وزيادة فرصة اكتشاف ورؤية الكائنات الطفيلية، فيتم استخدام تقنيات التركيز.

ما هي تقنيات التركيز

• تقنيات التركيز لعينات البراز (Concentration  For Stool Samples): هي تقنيات يتم فيها استخدام مواد وجهاز الطرد المركزي؛ لتشكيل رواسب أو مواد عائمة من عينات البراز، وتجميعها أسفل أو أعلى أنبوب الاختبار، ثم القيام بفحص هذه الرواسب أو المواد العائمة تحت الميكروسكوب، ورؤية الأطوار الطفيلية التي لا يمكن رؤيتها بفحص عينة البراز المباشر.

ما هو مبدأ عمل تقنيات التركيز

• يقوم مبدأ عمل تقنيات التركيز على الجاذبية النوعية (Specific Gravity) للمحاليل والكائنات الحية الطفيلية.

• يتم من خلال مواد معينة على عينات البراز مثل الأسيتات الإيثيل والفورمالين وغيره، ثم وضع هذه العينات في جهاز الطرد المركزي أو لا يتم وضعه حسب نوع التقنية، فتستقر الأطوار الطفيلية في أسفل أو أعلى الأنبوب؛ لأن الطفيليات الموجودة قد تكون أثقل أو أخف من المحلول.

• ثم يتم صب المادة الطافية، وإعداد وفحص الرواسب بمحلول ملحي مركز، أو مستحضر رطب باليود، وإكمال تقنية التركيز.

طرق وأنواع تقنيات التركيز

تتم تقنيات التركيز عن طريق:

1- التركيز بالتعويم

• التركيز بالتعويم (Concentration by flotation): وهي تقنية يتم فيها استخدام محاليل ذات ثقل نوعي أعلى من الكائنات الحية المراد الكشف عنها، حتى تطفو هذه الكائنات، وترتفع إلى الأعلى، ويغوص الحطام إلى القاع.

• إن الميزة الرئيسية لتقنية التركيز بالتعويم هي إنتاج مادة أنظف من تقنية التركيز بالترسيب.

• تتمثل عيوب معظم تقنيات التعويم في أن جدران البيض والأكياس غالباً ما تنهار، مما يعيق رؤيتها، وكما أن بعض بيض الطفيليات لا تطفو.

• هناك ثلاثة أنواع من تقنية التركيز بالتعويم، والتي يتم فيها استخدام محاليل ثقيلة وبناء على كل محلول تسمى التقنية، فمثلاً يتم استخدام كلوريد الصوديوم المشبع وهو محلول ملحي وتسمى التقنية بتقنية محلول الملح المشبع (Saturated Salt Solution technique)، ويتم استخدام جهاز الطرد المركزي وسكر الشيذر وتسمى تقنية التعويم بالطرد المركزي وسكر الشيذر (Sheather’s Sugar Centrifugal Flotation technique)، ويتم استخدام الطرد المركزي وكبريتات الزنك (ZNSO4) وتسمى تقنية التعويم بالطرد المركزي لكبريتات الزنك (Zinc Sulphate Centrifugal Flotation technique).

2- التركيز بالترسيب

• التركيز بالترسيب (Concentration by sedimentation): هي تقنية يتم فيها استخدام  محاليل ذات ثقل نوعي أقل من الكائنات الطفيلية ومع استخدام جهاز الطرد المركزي، وبالتالي تتجمع هذه الكائنات على شكل رواسب.

• يوصى باستخدام تقنيات الترسيب لمختبرات التشخيص العامة؛ لأنها أسهل في الأداء وأقل عرضة للأخطاء الفنية.

• يوجد نوعين رئيسين من تقنية التركيز بالترسيب المستخدمة في مراكز مكافحة الأمراض والوقاية وهي: تقنية الترسيب البسيط (Simple sedimentation)، وتقنية الترسيب بأسيتات الفورمالين وإيثيل (formalin-ethyl acetate technique) وهي تقنية ترسيب ثنائية الطور تتجنب مشاكل قابلية الإيثر للاشتعال، والتي يمكن استخدامها مع العينات المحفوظة في الفورمالين أو MIF أو SAF.

إيجابيات وسلبيات تقنيات التركيز

هناك العديد من الإيجابيات والسلبيات لتقنيات التركيز، وهي:

• الإيجابيات: تزيد تقنيات التركيز من عدد الكائنات الحية المكتشفة، والتي قد تكون صغيرة جداً، بحيث لا يمكن رؤيتها بواسطة الفحص المجهري المباشر وحده، كما يمكن استعادة بيض الديدان واليرقات والأكياس.

• السلبيات: إن معظم أنواع التركيز تدمر الأطوار الخضرية، ولن يتم رؤية الكائنات الحية الأولية؛ لأنه يتم تدميرها أثناء إجراءات التركيز، ولذلك يكون الفحص المجهري المباشر لعينات البراز إلزامياً كمرحلة أولية، وقبل البدء بإحدى تقنيات التركيز.

استخدامات تقنيات التركيز

يتم استخدام تقنيات التركيز في:

• تُستخدم تقنيات التركيز في إمكانية العثور على أطوار البويضات أو الأكياس أو اليرقات في عينات البراز، التي لا يمكن رؤيتها بالفحص المجهري المباشر.

• تُستخدم تقنيات التركيز في معرفة ما إذا كان علاج الطفيليات ناجحاً أم لا، من خلال انخفاض أعداد الطفيليات أو عدم وجودها نهائياً في العينة بعد أن كانت مليئة بالطفيليات.

• تُستخدم تقنيات التركيز في العثور على بويضات البلهارسيا  أو الديدان الشريطية البقرية أو الديدان الشريطية الوحيدة، لأن أعدادها تكون قليلة، ولم يتم رؤيتها في الفحص الروتيني، ويشتبه في وجودها.

• تُستخدم تقنيات التركيز في فحص عينات البراز للمرضى الذين يأتون من منطقة يوجد بها كائن طفيلي معين.

• تُستخدم تقنيات التركيز إذا كان عدد الكائنات الحية في عينات البراز منخفضاً، والفحص الرطب المباشر لا يكشف وجود هذه الطفيليات، فيجب تركيز  عينة البراز كلما أمكن ذلك.

• تُستخدم تقنيات التركيز عندما يكون الفحص الأولي للحامل  سلبياً على الرغم من الأعراض السريرية، والتي تشير إلى إصابة المريض بالعدوى الطفيلية.