طرق الزراعة على الميديا في مختبر الميكروبيولوجي

علم الأحياء الدقيقة:

تعد الميكروبات إحدى أهم الأسباب الرئيسية التي تؤدي إلى الأمراض والالتهابات، لذلك لا بد من طريقة ليتم رصد فيها هذه الميكروبات الممرضة وبشكل خاص طرق لرصد البكتيريا، لهذا السبب تم اكتشاف طرق لزراعة وعزل الميكروبات، بحيث أنه تم رصد وعزل البكتيريا لأول مرة في التاريخ في أواخر القرن السابع عشر من قبل أنطون فون ليفينهوك.

لكن في تلك الفترة لم تكن موضوع للدراسة وتطوير حتى مطلع القرن التاسع عشر حيث أصبحت البكتيريا وميكروبات الأخرى من الواضح أنها السبب الرئيسي للمرض عن الإنسان، مما دفع روبرت كوخ ولويس باستور إلى دراسة علم الأحياء الدقيقة وابتكار طرق لعزل البكتيريا والميكروبات الأخرى الممرضة عند طريق زراعتها في وسط اصطناعي تم تحضيره داخل المختبر، بحيث أنه من الجدير بالذكر أن اكتشاف طرق زراعة البكتيريا وعزلها من أعظم الدراسات التي تم اكتشافها في علم الأحياء الدقيقة.

زراعة وعزل البكتيريا:

في البداية قبل التعرف على التقنيات المستخدمة في علم الأحياء الدقيقة السريري لزراعة وعزل البكتيريا، يجب معرفة الأدوات والمعدات المستخدمة في تقنيات الزراعة البكتيريا وعزلها ومن أهم هذه الأدوات والمعدات:

• يتم استخدام حلقات التلقيح أو الإبر (Inoculating loops)، بحيث الهدف منها نقل الكائنات الحية الدقيقة أو تستخدم في أخذ جزء بسيط من العينات الممرضة بحيث تكون هذه الحلقات في أقطار وأحجام مختلفة، ويتم استخدام هذه الأحجام حسب الحاجة أثناء عملية الزراعة بحيث يتكون من جزء معدني وجزء مصنوع من بلاستيك، ويجب تعقيم هذه الحلقات (Inoculating loops) بين كل استخدام والآخر بواسطة موقد النار أو ما يعرف بموقد البنسين، والهدف من عملية التعقيم تجنب التلوث ونقل العدوى للعينات الأخرى.

• أطباق البتري (Petri dishes) وتعرف في اسم آخر (plates) وهي عبارة عن أطباق مغطاة يتم فيها زراعة الكائنات الحية الدقيقة بعد أن يتم تعبئتها في الآجار (ager) أو في الميديا ويعتمد شكل وحجم (Petri dishes) على نوع الميديا المستخدمة في الزراعة.

• موقد النار أو موقد البنسين ويستخدم في تعقيم الأدوات والمعدات المستخدمة في تقنية الزراعة البكتيريا، وأيضاً يجب أن يبقى مشتعل خلال عملية الزراعة للبكتيريا حتى يقوم على تعقيم الأجواء المحيطة بعملية الزراعة.

• الحاضنات ويتم استخدامها بعد الانتهاء من عملية الزراعة، ويتم وضع فيها (Petri dishes) بعد عملية الزراعة ضمن درجات حرارة تعتمد على نوع العينة ونوع البكتيريا المسببة للمرض.

1- إجراءات الاشتعال:

يقصد في إجراءات الاشتعال استخدام موقد النار من أجل التعقيم.

أولا: اشتعال حلقات التلقيح (Flaming a loop)

• يتم عملية اشتعال حلقات التلقيح قبل تقنية زراعة العينات وبعد الانتهاء من تقنية الزراعة.

• يتم وضع جزء المعدني الذي يحتوي على حلقة التلقيح على موقد نار إما الجزء البلاستيك في قبضة اليد بعيداً عن النار.

• وضع الجزء المعدني بزاوية تقدر 60 درجة على الجزء العلوي من النار.

• الاستمرار في وضع الجزء المعدني حتى يتحول إلى اللون الأحمر.

• يجب التأكد من أن جميع أجزاء الجزء المعدني تم تسخينها باستخدام اللهب.

• يتم تبريد (Inoculating loops) عن طريق وضعه على طرف الميديا لكن يجب الحذر من عدم جرح الميديا ويجب تغطية الميديا على الفور بعد الانتهاء من عملية التبريد لتجنب تلوث الميديا.

• يجب عدم (Inoculating loops) على سطح غير معقم ويجب تعقيم (Inoculating loops) بعد الانتهاء من الاستعمال مباشرة.

ثانياً: تعقيم عنق أنابيب الاختبار باستخدام اللهب (Flaming the neck of bottles)

• القيام بحمل أنبوب الاختبار  ورفعة إلى الأعلى باستخدام اليد اليسرى.

• القيام بفك غطاء أنبوب الاختبار باستخدام اليد اليمنى.

• يتم تمرير عنق أنبوب الاختبار على موقد اللهب إلى الأمام والخلف.

• يتم استخدام اليد اليمنى لإعادة غطاء أنبوب الاختبار.

2- البدء في الزراعة (Inoculation):

تستخدم في عملية الزراعة (Inoculating loops) حيث يقوم على التخفيف التدريجي للعينة التي تحتوي على البكتيريا الممرضة، وهو الهدف من عملية الزراعة الحصول على البكتيريا الممرضة بشكل مخفف حتى نتمكن من إيجاد مستعمرات بكتيرية نقية معزولة بالتالي يسهل التعامل معها وتتضمن عملية (inoculation) سلسلة من خطوات وتتلخص في ما يلي:

• تعقيم (Inoculating loops) وعنق انبوبة الاختبار باستخدام اللهب.

• بعد تعقيم (Inoculating loops) يتم إدخاله إلى داخل أنبوب الاختبار الذي يحتوي على العينة المرضية، بحيث يتم ادخال الجزء المعدني الذي يحتوي على حلقة التلقيح، حتى يتم أخذ كمية معينة من العينة وتعتمد هذه الكمية على حجم حلقة التلقيح.

• رفع غطاء (Petri dishes) الذي يحتوي على نوع الآجار (ager) المناسب لنوع العينة ونوع البكتيريا.

• وضع العينة التي تم سحبها باستخدام (Inoculating loops) في (Petri dishes) والبدء بعملية التخفيف التدريجي للعينة باستخدام (Inoculating loops) ويفضل عمل حركة (zig zag) أثناء التخفيف العينة.

• تغطية (Petri dishes) ثم اقلب الطبق 90 درجة.

• تعقيم حلقة تلقيح بعد الانتهاء من تقنية الزراعة.

• وضع اسم المريض وتاريخ زراعة العينة ووقت زراعة على (Plates).

• وضع (Petri dishes) في الحاضنة لمدة 24 ساعة على الأقل.