ما هي ميديا EMB المستخدمة في مختبر الميكروبيولوجي

أهداف مختبر الأحياء الدقيقة السريري:

يسعى مختبر الأحياء الدقيقة السريري جاهداً لتشخيص العينات المرضية ناتجة عن الأمراض والتهابات التي سببها الكائنات الحية الدقيقة، وتختلف طرق التشخيص المستخدمة في مختبر الأحياء الدقيقة السريري منها عن طريق استخدام فحوصات بيوكيميائية مختلفة، ومنها عن طريق اختبارات الحساسية للمضادات الحيوية.

والأهم من ذلك عن طريق الوسائط الصناعية التي يتم تحضيرها في المختبر التي تقوم على تعزيز نمو وتكاثر الكائنات الحية الدقيقة لتكوين مستعمرات من خلايا هذه الميكروبات، وتختلف الوسائط البيئة الصناعية داخل المختبر حسب اختلاف حاجة الكائنات الحية الدقيقة لمعايير النمو وتكاثر وحسب حاجة مختبر الميكروبيولوجي لسهولة التشخيص وتميز بين أنواع الكائنات الحية الدقيقة.

ما هي ميديا EMB؟

ميديا (EMB): هي اختصار (Eosin Methylene Blue) حيث إنها إحدى أنواع الميديا التي يتم تحضيرها صناعياً داخل مختبر الأحياء الدقيقة السريري، حيث تعتبر من أنواع الميديا التفاضلية الانتقائية (selective and differential medium) لأنها تعزز نمو البكتيريا سالبة الجرام وتثبط نمو البكتيريا موجبة الجرام، حيث لا تستطيع البكتيريا موجبة الجرام النمو وتكاثر وتكوين مستعمرات بكتيرية من خلالها.

بالإضافة إلى أنها تستخدم للتميز بين أنواع البكتيريا سالبة الجرام وذلك لما تحتوي في مكوناتها من أصباغ وأنواع من سكر على سبيل المثال تحتوي هذه الميديا في مكوناتها على سكر اللاكتوز تستطيع بعض أنواع البكتيريا سالبة الجرام على تخمر اللاكتوز مثل (E. coli) بالتالي تعطي ألون الأخضر الإمع في المقارنة بالبكتيريا (Pseudomonas، Salmonella، Shigella) لا تستطيع تخمر اللاكتوز.

أهم مكونات ميديا EMB:

يتم تحضير الميديا (EMB) صناعياً في المختبر، حيث إنه أثناء تحضير الميديا يؤخذ بعين الاعتبار أنها من النوع (selective and differential medium) أي إنها تفاضلية انتقائية، انتقائية (Selective) أي إنها تعزز نمو البكتيريا سالبة الجرام وتثبيط نمو البكتيريا موجية الجرام وذلك بسبب احتواها على كلا الصبغتين (Eosin and Methylene blue)، حيث وجود هذا النوع من الصبغات في تركيبة الميديا يؤدي إلى تثبيط نمو البكتيريا موجبة الجرام، إما بالنسبة إلى إنها تفاضلية (Differential) وذلك بسبب وجود في تركيبها مخمرات اللاكتوز الذي يستخدم لتميز بين أنواع البكتيريا سالبة الجرام، ومن أهم مكونات هذه الميديا:

• الماء المقطر.

• مكونات من الانسجة الحيوانية المهضومة.

• فوسفات ثاني البوتاسيوم بنسب قليلة جداً.

• اللاكتوز.

• السكروز.

• أنواع من الصباغات (Eosin and Methylene blue) وتعتبر أيضاً بمثابة مؤشر (PH)، ويجب أن يكون 7،2.

• الآجار المصنوع ويكون عبارة عم باودر.

مبدأ عمل ميديا EMB:

تتميز الميديا (EMB) بوجود مزيج من صبغات (Eosin and Methylene blue) بنسبة 6 إلى 1، وأيضاً تتميز بوجود نوعين من السكر ووجودهما يعتبر مصدر للطاقة بالنسبة للبكتيريا وهما اللاكتوز والسكروز، حيث إن البكتيريا سالبة الجرام التي تستطيع تخمر اللاكتوز الموجود داخل الميديا تنتج مادة حامضة بالتالي تعمل على خفض درجة الحموضة (PH) داخل الميديا، وهذا يشجع على امتصاص المستعمرات البكتيرية للصبغة مما يؤدي إلى تحول لون المستعمرات البكتيرية إلى اللون الأرجواني الداكن.

لكن بعض أنواع البكتيريا التي تستطيع تخمر اللاكتوز تظهر مستعمراتها مسطحة ومظلمة ذات لمعان معدني أخضر، وبعضها الآخر تظهر مستعمراتها مخاطية أكبر حجمًا ، وغالبًا ما تكون أرجوانية فقط في مركزها، ومن ناحية أخرى أنواع البكتيريا التي لا تستطيع تخمر اللاكتوز تعمل على زيادة الرقم الهيدروجيني (PH) عن طريق نزع المستعمرات البكتيرية للبروتينات الموجودة داخل الميديا، مما يؤدي إلى ظهور مستعمرات عديمة اللون أو فاتحة اللون.

طريقة تحضير ميديا EMB:

• ارتداء القفازات والكمامات، وتعقيم مساحة العمل بواسطة المطهرات الكيميائية.

• تعقيم كافة الأدوات والمعدات المستخدمة في عملية تحضير الميديا.

• ضع الماء المقطر في القارورة الزجاجية المعقمة بكمية تناسب كمية الميديا المراد صنعها.

• ضع القارورة الزجاجية (Flask) على مصدر النار، وضع المحرك المغناطيسية (magnetic)، ثم يتم إضافة الآجار المصنع ببطء وبشكل تدريج قبل تسخين الماء حتى لا يتكتل الآجار ويذوب تماماً.

• المراقبة المستمرة للسائل حتى يوصل لدرجة الغليان ويتحول إلى الشكل النقي.

• يتم تبريد القارورة الزجاجية عن طريق وضعها في حمام مائي لمدة تتراوح ما بين 15 إلى 20 دقيقة في درجة حرارة تتراوح 50 درجة مئوية، والهدف من الحمام المائي من أجل أكسدة (methylene blue) وتعليق كافة الرواسب.

• صب المزيج في (Petri plates) معقم والسماح لها إن تصل إلى درجة حرارة الغرفة.

• يتم تدوين تاريخ ووقت التحضير على (Petri plates) ووضعها في ثلاجة معقمة لدرجة حرارة تتراوح ما بين 2 إلى 6 درجة مئوية.

• تعقيم كافة الأدوات المستخدمة في عملية التحضير، بالإضافة إلى تعقيم مساحة العمل.