اقرأ في هذا المقال
- خصائص محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
- مكونات محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
- مبدأ عمل محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
- كيفية تحضير محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
- خطوات إجراء التلطيخ بمحلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
- نتيجة التلطيخ بمحلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني (Lactophenol Cotton Blue (LPCB)): هو محلول مائي وعامل تلطيخ نسيجي بسيط، يُستخدم للفحص المجهري والتعرف على الفطريات، ويساعد هذا المحلول على تلوين وتحديد الخلية الفطرية وتركيبها في العينة، كما يمكن استخدامه للكشف عن بعض أنواع الطفيليات.
خصائص محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
إن محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني العديد من الخصائص، وهي:
- إن محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني محلول متصاعد وعامل تلطيخ وتلوين.
- يُعطي محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني العينة مظهراً أزرق اللون، وتكون الأحياء الدقيقة والتراكيب الفطرية مثل الخيوط.
- يعمل محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني على تحديد جدران الخلايا الفطرية.
- يستخدم محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني في علم الفطريات الطبي لفحص بنية الخلايا الفطرية، وذلك عن طريق تحضير لوح مبلل يتكون من عنصرين مهمين مثل الميثيل الأزرق واللاكتوفينول.
- قد يتواجد محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني على شكل مسحوق محضر تجارياً، أو يتم تحضيره في المختبر.
- يمكن استخدام هذا المحلول للتعرف على الفطريات الناضجة وتراكيبها، وليس الأشكال الصغيرة للفطريات.
- لا يمكن تخزين المحلول المحضر لفترة طويلة من الزمن.
مكونات محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
إن محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني ذو لون أزرق، ويتكون من مزيج من المكونات التالية:
- الفينول (Phenol): يعمل كمطهر عن طريق قتل الكائنات الحية الدقيقة مثل الفطريات.
- حمض اللاكتيك (Lactic acid): يعمل حمض اللاكتيك كعامل مقاصة، ويساعد في الحفاظ على التراكيب الفطرية.
- القطن الأزرق (Cotton blue): هو صبغة الأنيلين ذات اللون الأزرق، التي تلطخ الكيتين في جدران الخلايا الفطرية، مما يضيف لوناً إلى الخلية الفطرية، وبالتالي يعزز ويتناقض مع التراكيب الفطرية الأخرى.
- الجلسرين (Glycerol): وهو مادة لزجة تمنع جفاف عينة الشرائح المحضرة.
مبدأ عمل محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
يقوم مبدأ عمل محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني على:
- إن الفطريات كائنات حقيقية النواة، ولها خصائص مجهرية وميكروسكوبية، ويتكون جداره خليتها البوغية من مادة الكيتين، والتي تلون مكوناتها بمحلول اللاكتوفينول الأزرق القطني.
- يقوم الفينول في قتل الخلية الفطرية، ويحافظ حمض اللاكتيك على بنيتها من الدمار، ويثبط الجلسرين النشاط الخلوي للفطر، ويقوم القطن الأزرق بتلطيخ الكيتين في جدران الخلايا الفطرية كلون أزرق فاتح.
كيفية تحضير محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
يمكن تحضير محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني كالتالي:
- يتم إضافة 20 مل من حمض اللاكتيك في دورق.
- يتم إضافة 40 ملي لتر من الجلسرين.
- يتم إضافة 20 ملي لتر من الماء المقطر.
- يتم إضافة 22 جرام من بلورات الفينول أو 22 مل من الفينول المذاب.
- يتم إضافة 0.05 جرام من القطن الأزرق أو الميثلين الأزرق.
- يتم تسخين المحلول وتحركيه جيداً لإذابة المكونات، ولا يجب أن يتم غليه أعلى من درجة حرارة 100 درجة مئوية.
- يُترك المحلول لكي يبرد، ويمكن تخزينه في درجة حرارة الغرفة، ويتم تحضيره قبل يومين على الأقل من الاستخدام.
خطوات إجراء التلطيخ بمحلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
هناك طريقتين رئيستين لعمل تلطيخ للعينة بهذا المحلول وهما:
1. الطريقة الأساسية
إن الطريقة الأساسية للتلطيخ بمحلول اللاكتوفينول الأزرق القطني تتطلب تحضير شريحة مجهرية خالية من الزيت أو الشحوم، وتكون على النحو الآتي:
- يتم وضع قطرة من اللاكتوفينول الأزرق على شريحة نظيفة خالية من الزيت.
- يتم إضافة العينة الفطرية فوق هذه القطرة من اللاكتوفينول الأزرق باستخدام إبر التلقيح المعقمة أو سلك التلقيح الصلب من الوسط الغذائي للفطريات، وليس الحلقة المستخدمة للبكتيريا أو الخمائر.
- يتم فرد العينة الفطرية برفق بمساعدة اثنين من هذه الأدوات، بحيث تنتشر بشكل رقيق في اللاكتوفينول.
- يتم وضع حافة نظيفة (غطاء الشريحة) على خليط اللاكتوفينول وعينة فطرية، ثم يتم خفضها ببطء، وذلك لتجنب محاصرة فقاعات الهواء تحت الغطاء.
- بعد الانتهاء من كل شيء يتم فحص الشريحة تحت المجهر.
2. طريقة الشريط
تتضمن طريقة الشريط تحضير شريط السيلوفان أو الشريط الشفاف للفحص المجهري للفطريات، وهي طريقة سهلة الأداء وغير مكلفة وسريعة، وتكون على النحو الآتي:
- يتم قص شريطاً من الشريط اللاصق الشفاف، ويتم وضع الأطراف بين إصبع الإبهام والسبابة مع إخراج الجانب اللاصق.
- عمل حلقة تمتد للخارج عن طريق إغلاق الإبهام والسبابة، ثم فتح طبق الزراعة باليد الأخرى، والضغط على الشريط في عينة الزراعة.
- يتم وضع قطرة من محلول اللاكتوفينول الأزرق القطني على شريحة زجاجية نظيفة.
- يتم الضغط على المحلول بالشريط اللاصق بسلاسة عن طريق فتح الأصابع واستخدام الشاش.
- يتم وضع قطرة أخرى من المحلول أعلى الشريط.
- يتم وضع غطاءاً كبيراً ونظيفاً فوق الشريحة.
- بعد الانتهاء من كل شيء يتم فحص الشريحة تحت المجهر.
نتيجة التلطيخ بمحلول اللاكتوفينول الأزرق القطني
تكون نتيجة التلطيخ بمحلول اللاكتوفينول الأزرق القطني على النحو الآتي:
- يلون هذا المحلول الجراثيم الفطرية والخيوط والتركيبات المثمرة باللون الأزرق، بينما يلون الخلفية باللون الأزرق الباهت أو الشاحب.
