اقرأ في هذا المقال
- ما هي ميديا TCBS Agar؟
- مكونات ميديا TCBS Agar
- مبدأ عمل ميديا TCBS Agar
- طريقة تحضير ميديا TCBS Agar
- نتائج المستعمرات البكتيرية في ميديا TCBS Agar
ما هي ميديا TCBS Agar؟
ميديا (TCBS Agar): هي إحدى أنواع الميديا يتم تحضيرها صناعياً داخل مختبر الأحياء الدقيقة السريري، ويعبر (TCBS) اختصار لمصطلح (Thio sulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar)، حيث تستخدم الميديا من النوع (TCBS Agar) في عزل سلالات من بكتيريا (Vibrio spp) سواء كانت من النوع الممرض أم لا حيث إن النوع ممرض منها تسبب في مرض الكوليرا.
حيث يتم استقبال في مختبر الأحياء الدقيقة السريري مجموعة واسعة من العينات السريري الممرضة أو غير السريرية الخاصة بهذا النوع من البكتيريا، حيث أنه تم تطوير ميديا (TCBS Agar) من خلال تعديل الصبغة الأصلية الموجودة داخل الميديا حتى تستخدم فقد للعزل الانتقائي لأنواع البكتيريا (Vibrio spp) الممرضة فقد حيث إن هذا النوع من البكتيريا يسبب التهاب شديد في الأمعاء.
مكونات ميديا TCBS Agar:
يقوم موظفين مختبر الأحياء الدقيقة السريري عند تحضير ميديا (TCBS Agar) على اختيار مكونات تقوم في تعزيز نمو وتكاثر بكتيريا من النوع (Vibrio spp) داخل الميديا من أجل نموها وتكاثرها لتكوين مستعمرات بكتيرية يسهل عزلها ودراسة العمليات الأيضية لها وأيضاً سهولة التميز والتفرقة بين أنواع السلالة الواحدة، ومن أهم مكونات ميديا (TCBS Agar):
- ماء منزوع الأيونات (deionized water).
- السكروز (Sucrose).
- ديبيبتون (Dipeptone).
- سترات الصوديوم (Sodium Citrate).
- كلوريد الصوديوم (Sodium Chloride).
- خلاصة الخميرة (Yeast Extract).
- كولات الصوديوم (Sodium Cholate).
- سترات الحديد (Ferric Citrate).
- صبغة (Bro mothymol Blue).
- صبغة (Thymol Blue).
- أجار (agar) صناعي على شكل باودر.
- مؤشر الرقم الهيدروجيني، حيث يتراوح قيمة (PH) 8،6.
مبدأ عمل ميديا TCBS Agar:
تستخدم ميديا (TCBS Agar) في نمو وتكاثر و عزل البكتيريا المعوية من عائلة (Vibrio cholerae)، حيث يحتوي ميديا (TCBS Agar) على ثيوسلفات وسيترات الصوديوم بحيث لهما دور بشكل كبير في منع نمو وتكاثر البكتيريا المعوية (Enterobacteria)، كما تحتوي ميديا (TCBS Agar) على كولات الصوديوم (Sodium Cholate) التي لها دور كبير في منع نمو وتكاثر البكتيريا موجبة الجرام.
حيث تقوم سلالات بكتيريا (Vibrio cholerae) على تخمر السكوز الموجود داخل الميديا مما يؤدي إلى إنتاج مواد حمضية ومخلفات عضوية التي تؤدي بدورها إلى تغير صبغة (Bro mothymol Blue) من لون الأزرق إلى لون الأصفر التي تعمل بمثابة مؤشر للرقم الهيدروجيني (PH)، في الإضافة إن الميديا تحتوي على ثيوسلفات وسترات الحديد حيث إنهم عبارة عن مصدر للكبريت حيث يتم إنتاج كبريتيد الهيدروجين من خلالها، إما بالنسبة للخميرة والبيبتون لهم دور في توفير النيتروجين والأحماض الأمينية داخل الميديا (TCBS Agar).
طريقة تحضير ميديا TCBS Agar:
- ارتداء القفازات والكمامات، وتعقيم مساحة العمل بواسطة المطهرات ومعقمات الكيميائية.
- تعقيم كافة الأدوات والمعدات المستخدمة في تقنية تحضير الميديا.
- ضع كمية من الماء المنزوع الأيونات في القارورة زجاجية معقمة (flask)، بحيث تكون كمية ماء تناسب كمية الميديا المراد تحضيرها.
- ضع القارورة الزجاجية على النار، ضع المحرك المغناطيسي في القارورة الزجاجية.
- ضع ببطء وبشكل تدريجي الأجار الخاص في ميديا (TCBS Agar) قبل إن يسخن الماء، ثم أرفع درجة حرارة النار تدريجياً.
- مراقبة القارورة الزجاجية حتى يذوب مسحوق الأجار (Agar) بشكل كامل ويتحول المزيج إلى المظهر النقي.
- يجب عدم وضع المزيج في الأوتوكلاف (autoclave).
- وضع المزيج في حمام مائي في درجة حرارة تتراوح 50 درجة مئوية، يتم استخدام ميزان الحرارة المعقم لتأكد من درجة حرارة الماء.
- يتم صب الميديا في (Petri plates) معقمة بعد أن تبرد وتصل درجة حرارتها من درجة حرارة الغرفة، استخدم ميزان الحرارة لمراقبة حرارة الميديا.
- يتم تسجيل على (Petri plates) وقت وتاريخ تحضير الميديا.
- ضع (Petri plates) في ثلاجة معقمة للتخزين ضمن درجة حرارة تتراوح ما بين 2 إلى 6 درجة مئوية.
- تعقيم كافة الأدوات والمعدات المستخدمة في تقنية تحضير الميديا، في الإضافة القيام على تعقيم مساحة العمل بواسطة المطهرات الكيميائية، لتجنب أي مصادر تلوث.
نتائج المستعمرات البكتيرية في ميديا TCBS Agar:
- تظهر خصائص مستعمرات البكتيريا من النوع (Vibrio cholera) على ميديا (TCBS Agar) في اللون الأصفر ومسطحة في قطر يتراوح ما بين 2 إلى 4 مم.
- تظهر خصائص مستعمرات البكتيريا من النوع (Vibrio alginolyticus) على ميديا (TCBS Agar) مستعمرات صفراء كبيرة في حجم.
- مظاهر مستعمرات البكتيريا من النوع (Vibrio fluvialis and Vibrio vulnificus) على ميديا (TCBS Agar) صفراء وشفافة.
- مستعمرات البكتيريا من النوع (Vibrio parahaemolyticus) على ميديا (TCBS Agar) مستعمرات عديمة اللون ذات مركز أخضر.
