ميديا Chocolate Agar المستخدمة في مختبر الميكروبيولوجي

استخدامات الميديا في مختبر الأحياء الدقيقة السريري:

يحتاج قسم مختبر الأحياء الدقيقة السريري على العديد من أنواع الميديا حتى تقوم على تلبية حاجة الكائنات الحية الدقيقة من أجل النمو والتكاثر لتكوين مستعمرات من الخلايا الميكروبية بالتالي سهولة عزلها ودراسة العوامل الأيضية لها.

وتختلف هذه الأنواع من الميديا بسبب اختلاف معايير النمو في مكوناتها الأساسية، حيث إنه كل نوع من الميديا يحتوي على عناصر وعوامل تعزز نمو فئة معينة من الكائنات الحية الدقيقة وتميزها عن غيرها من الميكروبات الأخرى.

ما هي ميديا Chocolate Agar؟

ميديا (Chocolate Agar): هي عبارة عن إحدى أنواع الميديا الذي يتم استخدامه في مختبر الأحياء الدقيقة السريري، حيث إنه يتم تحضيرها داخل مختبر صناعياً أو الحساسة ليكون وسط صناعي غني (enriched medium) غير انتقائي (non-selective) يستخدم لعزل وتحديد مسببات الأمراض الصعبة أو ما يطلق عليها اسم (fastidious pathogens).

ويتم تحضير ميديا (Chocolate agar) عن طريق رفع درجة حرارة أو تسخين (blood agar) مما يؤدي إلى تمزق خلايا الدم الحمراء الموجودة داخل (blood agar) بالتالي إطلاق العناصر الغذائية التي تساعد على نمو البكتيريا الحساسة (fastidious bacteria)، ومن أهم أنواع البكتيريا التي تنو وتتكاثر على هذا النوع من الميديا (Haemophilus) وأيضاً (Neisseria species)، حيث إنه من الجدير بالذكر إن ميديا (Chocolate agar) سمي بهذا الاسم لأنه عند تحلل وتمزق خلايا الدم الحمراء تعطي الوسط لوناً بنياً يشبه الشوكولا.

المكونات الأساسية في ميديا Chocolate agar:

على الرغم من إن ميديا (Chocolate agar) يتم تحضير من (blood agar) عن طريق تسخينه في حمام مائي، إلا إنه ظهر مؤخراً تركيبة صناعية تقوم على تحضير (Chocolate agar) بشكل مباشر دون الحاجة إلى تسخين (blood agar)، حيث إن هذه التركيبة الصناعية تختلف عن تركيبة الصناعية المكونة في (blood agar)، وتحتوي هذه التركيبة الصناعية على مواد أهمها:

• خلاصة من الأنسجة الحيوانية المهضومة.

• فوسفات البوتاسيوم، ثنائي القاعدة.

• فوسفات البوتاسيوم، أحادي القاعدة.

• نشا الذرة.

• كلوريد الصوديوم (NA CL)، موجودة بتراكيز قليلة.

• الماء المقطر.

• أجار (agar) الصناعي، ويكون على شكل البودرة.

• محلول الهيموجلوبين بنسبة 2٪.

طريقة تحضير ميديا chocolate agar:

• يجب ارتداء القفازات والكمامات، وتعقيم مساحة العمل بواسطة بعض المطهرات الكيميائية.

• يجب تعقيم المعدات المستخدمة قبل استخدامها تجنب حدوث التلوث للميديا.

• ضع الماء المقطر في قارورة الزجاجية (flask)، بحيث تكون كمية الماء تناسب مع الكمية المراد صنعها من الميديا.

• ضع المحرك المغناطيسي في القارورة الزجاجية، وضع القارورة الزجاجية على مصدر النار.

• ضع الآجار (ager) المصنع ببطئ وبشكل تدريجي في القارورة الزجاجية، والبدء في رفع درجة حرارة النار تدريجياً.

• مراقبة المستمرة للمزيج حتى الوصول إلى درجة الغليان، ثم تحول المزيج من الحالة الغائمة إلى الشكل النقي.

• تبريد القارورة الزجاجية، وبعد تبريدها إلى حرارة تصل إلى 50 درجة مئوية ضع النسبة المناسب من الدم مع تحريك مستمر أثناء وضع الدم.

• بعد وضع الدم يتم وضع القارورة الزجاجية في حمام مائي ساخن يصل حرارته إلى 70 درجة مئوية مع تحريك المستمر للقارورة حتى يتحول لون الدم إلى ألون البني.

• يتم مرة أخرى تبريد القارورة الزجاجية، وبعد التبريد يتم صب السائل في (Petri plates) معقمة بعد تسجيل تاريخ ووقت التحضير الميديا.

• يتم تخزين الميديا الجاهزة في ثلاجات خاصة معقمة في درجة حرارة تتراوح ما بين 2 إلى 6 درجة مئوية.

• تعقيم كافة الأدوات المستخدمة في عملية التحضير الميديا، وتعقيم مساحة العمل.

ضبط الجودة في تحضير ميديا Chocolate agar:

• التأكد من مدة صلاحية وسلامة الآجار (ager) ووضعه في مكان تخزيم معقم ومناسب بعيداً عن مصادر الرطوبة.

• التأكد من تعقيم الأدوات والمعدات.

• التأكد من مدى تعقيم الحاضنة، والثلاجة المستخدمة في تخزين الميديا الجاهزة.

• التأكد من درجة حرارة لكل من الحاضنة والثلاجة بشكل مستمر.

• مراعاة قوانين السلامة العامة أثناء تحضير الميديا.

مبدأ عمل ميديا Chocolate agar:

عند تسخين خلايا الدم الحمراء يؤدي إلى تحلل خلايا الدم الحمراء وإطلاق العناصر الغذائية الموجودة داخل الخلايا مثل الهيموجلوبين، والهيمين العامل (X)، وأنزيم نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد عامل (NAD) أو ما يعرف في عامل (V) في الأجار لاستخدامها من قبل البكتيريا شديدة الحساسية (fastidious bacteria).

كما يعمل الببتون للخلايا الميكروبية على تزويدها في النيتروجين والأحماض الأمينية والعناصر الأخرى الضرورية للنمو وتكاثر هذه الخلايا، ويحافظ كلوريد الصوديوم على التوازن الأسموزي، يعمل النشأ على تخفيف التأثير الأحماض الدهنية السامة التي قد تؤثر على نمو بعض أنواع البكتيريا مثل (Neisseria species)، كما يساعد فوسفات البوتاسيوم في الحفاظ على درجة حموضة موحدة أثناء النمو وتكاثر البكتيريا.