اقرأ في هذا المقال
اختبار الكروماتوجرافي المناعي ((ICT) Immunochromatographic test): هو اختبار سريع على شكل شريط يهدف إلى اكتشاف وجود أو عدم وجود المادة التحليلية المستهدفة، ينتج عنه مزيج من الفصل اللوني، وذلك عن طريق فصل مكونات العينة بناءً على الاختلافات في حركتها من خلال مادة ماصة والتفاعلات الكيميائية المناعية.
أجزاء شريط اختبار ICT
تحتوي شرائط اختبار ICT على أربعة أجزاء رئيسية، وهي:
1. لوحة تطبيق العينة
- تكون هذه اللوحة مصنوعة من السليلوز أو الألياف الزجاجية، وتمتلك بداخلها قطعة شبيهة بالوسادة يتم تطبيق العينة عليها لبدء الفحص.
- يجب أن تكون وسادة العينة قادرة على نقل العينة بطريقة سلسة ومستمرة ومتجانسة.
- تشمل المعالجة المسبقة للعينة فصل مكونات العينة، وإزالة التداخلات، وتعديل الرقم الهيدروجيني.
- يجب إضافة عينة التحليل إلى لوحة تطبيق العينة لبدء الاختبار.
2. الوسادة المرافقة
- إن الوسادة المرافقة هي المكان الذي يتم فيه الاستغناء عن جزيئات الأجسام المضادة الموسوم، وعادة ما تكون مصنوعة من الألياف الزجاجية والسليلوز والبوليستر وبعض المواد الأخرى.
- تطلق مادة الوسادة المترافقة المادة المترافقة الموصوفة عند ملامستها لعينة سائلة متحركة.
- يجب أن يظل المُقارن المُصنَّف ثابتاً طوال فترة الحياة الكاملة لشريط التدفق الجانبي، ويمكن لأي اختلافات في الاستغناء عن المتقارن أو تجفيفه أو إطلاقه تغيير نتائج الفحص بشكل كبير.
- يمكن أن يؤثر التحضير السيئ للمقارن المسمى سلباً على حساسية الفحص.
3. غشاء الركيزة
- يتكون هذا الغشاء من النيتروسليلوز، وهو مهم للغاية في تحديد حساسية اختبار ICT.
- يتم رسم خطوط الاختبار فوق قطعة الغشاء، لذلك يجب أن يوفر الغشاء المثالي دعماً وربطاً جيداً لتحقيقات الالتقاط مثل الأجسام المضادة.
- يتميز الغشاء الجيد بقابلية امتصاص أقل وغير محدد في مناطق الاختبار وخطوط التحكم.
4. وسادة الامتصاص
- إن وسادة الامتصاص تعمل كمغسلة في نهاية الشريط، وتساعد في الحفاظ على معدل تدفق السائل فوق الغشاء، وتوقف التدفق العكسي للعينة.
- يمكن أن تلعب قدرة هذه الوسادة على الاحتفاظ بالسائل دوراً مهماً في نتائج الفحص.
آلية عمل اختبار ICT
تكون آلية عمل اختبار ICT على النحو الآتي:
- يتم تحضير الجسم المضاد، ثم التقاط الجسم المضاد ضد المادة التحليلية المستهدفة.
- تشل حركة الجسم المضاد على الوسادة المترافقة، والجسم المضاد الملتقط على غشاء الشريط لتشكيل خط الاختبار.
- يتم تجميع جميع المكونات على بطاقة دعم بعد الاستغناء عن الكواشف في منصاتها المناسبة.
- عندما يتم وضع العينة ويكون الفحص الإيجابي، فإنه يحدث تفاعل الجسم المضاد مع المادة المحللة في الاختبار، فيتغير اللون.
أشكال اختبار ICT
هناك ثلاثة أشكال من اختبار ICT، ويتم تحديد شكل الشريط لاختبار من خلال عدد التحليلات المستهدفة، وهذه الأشكال هي:
1. اختبار الساندويتش
إن عمل هذا الاختبار يكون كالتالي:
- يتم تثبيت الجسم المضاد المطلي بالملصق مثل الإنزيمات أو الجسيمات النانوية أو الأصباغ الفلورية في الوسادة المترافقة، ثم يتم التخلص منه بتدفق أي محلول عازل.
- يتم تجميد الجسم المضاد الملتقط ضد المادة التحليلية المستهدفة عبر خط الاختبار، ثم يتم تجميد الجسم المضاد الثانوي ضد الجسم المضاد الموسوم في منطقة التحكم.
- يتم تطبيق عينة تحتوي على المادة التحليلية على عينة لوحة التطبيق ثم تنتقل بعد ذلك إلى الأجزاء الأخرى من الشريط.
- يتم التقاط المادة التحليلية المستهدفة بواسطة الجسم المضاد الموسوم الثابت في الوسادة المترافقة، ويؤدي إلى تكوين مركب الجسم المضاد الموسوم التحليلي.
- يصل هذا المركب إلى غشاء النيتروسليلوز، ثم يتحرك تحت تأثير الشعيرات الدموية.
- يتم التقاط معقد الجسم المضاد الموسوم بالتحليل بواسطة جسم مضاد آخر يكون أساسياً للتحليل.
- يصبح المركب محشوراً بين الأجسام المضادة الموصوفة والأولية، مكوناً معقداً للجسم المضاد الأساسي التحليلي الموسوم.
- يتم التقاط الجسم المضاد الزائد الموسوم في منطقة التحكم بواسطة جسم مضاد ثانوي، ثم يذهب المخزن المؤقت أو المحلول الزائد إلى وسادة الامتصاص.
- تتوافق كثافة اللون عند خط الاختبار مع كمية التحليل المستهدف ويتم قياسها باستخدام قارئ شريط بصري أو يتم فحصها بصرياً، ويضمن ظهور اللون عند خط التحكم أن الشريط يعمل بشكل صحيح.
2. الاختبار التنافسي
- يحتوي الاختبار التنافسي على مخططين.
- في المخطط الأول: يتم تطبيق المحلول الذي يحتوي على المادة التحليلية المستهدفة على لوحة تطبيق العينة، ويتم ترطيب الجسم المضاد الموسوم مسبقاً ويبدأ التدفق مع السائل المتحرك، ويحتوي خط الاختبار على مستضد مثبت مسبقاً، ويحتوي خط التحكم على جسم مضاد ثانوي مثبت مسبقاً لديه القدرة على الارتباط بالجسم المضاد الموسوم، وعندما تصل العينة السائلة إلى خط الاختبار، فإن المستضد المثبت سوف يرتبط بالجسم المضاد الموسوم في حالة عدم وجود المادة التحليلية المستهدفة في محلول العينة، أو وجودها بكمية منخفضة بحيث تكون بعض مواقع اتحاد الجسم المضاد المسمى شاغرة، ثم يتنافس المستضد في محلول العينة والذي يتم تجميده عند خط اختبار الشريط للربط مع الجسم المضاد الموسوم.
- في المخطط الثاني: يتم الاستغناء عن اتحاد التحليل الموسوم في وسادة مترافقة، بينما يتم الاستغناء عن الجسم المضاد الأولي للتحليل عند خط الاختبار. بعد تطبيق المحلول التحليلي تحدث منافسة بين المادة التحليلية والمصنفة للارتباط بالجسم المضاد الأولي عند خط الاختبار، ويناسب هذا المخطط المركبات ذات الوزن الجزيئي المنخفض، التي لا يمكنها ربط جسمين مضادين في وقت واحد، ويعد غياب اللون عند خط الاختبار مؤشراً لوجود مادة التحليلية، بينما يشير ظهور اللون عند خطي الاختبار والتحكم إلى نتيجة سلبية.
3. اختبار الكشف المتعدد
- يُستخدم اختبار الكشف المتعدد للكشف عن أكثر من نوع مستهدف واحد، ويتم إجراء الفحص على الشريط الذي يحتوي على خطوط اختبار مساوية لعدد الأنواع المستهدفة المراد تحليلها.
- يعد تنسيق هذا الاختبار مفيداً جداً في التشخيص السريري، حيث يتم اكتشاف العديد من التحليلات التي تعتمد على بعضها البعض في تحديد مرحلة المرض.
- يمكن بناء شرائط التدفق الجانبي لهذا الغرض بطرق مختلفة، عن طريق زيادة الطول وخطوط الاختبار على الشريط التقليدي، مما يجعل الهياكل الأخرى مثل الخيوط المتوازية أو النجوم أو الشكل T.
الخطوات الرئيسية لعمل اختبار ICT
إن الخطوات الرئيسية لعمل اختبار ICT هي:
- يتم إضافة العينة وضعها على وسادة العينة.
- يتم انتظار تدفق العينة عبر خط الاختبار لمدة 5-10 دقائق.
- تقرأ النتيجة عندما يظهر اللون، وإذا لم يتغير شيء على الاختبار فإن النتيجة تكون سلبية.
استخدامات اختبار ICT
هناك العديد من الاستخدامات التي تُستخدم فيها اختبار ICT:
- يتم استخدام اختبار ICT في الكشف عن العديد من الأمراض مثل الاختبار السريع لفيروس نقص المناعة البشرية أو مرض الإيدز، والاختبار السريع للملاريا، واختبار حمى الضنك السريع، واختبار الزهري واختبار الإنفلونزا.
- يتم استخدام اختبار ICT في الكشف عن مسببات الأمراض النباتية.
- يتم استخدام اختبار ICT في الكشف سلامة الأطعمة والمواد الغذائية.
- يتم استخدام اختبار ICT في تحليل عينات البول لفحوصات عديدة كفحص الحمل.
- يتم استخدام اختبار ICT في الكشف عن الحساسية.
- يتم استخدام اختبار ICT في الكشف عن المخدرات.
- يتم استخدام اختبار ICT في الكشف عن الجلطات وعلامات القلب.
- يتم استخدام اختبار ICT في الكشف عن الخصوبة.
- يتم استخدام اختبار ICT في الكشف عن علامات ودلالات الأورام والسرطان.
