ما هي صبغة بابانيكولاو

صبغة بابانيكولاو (Papanicolaou stain): هي صبغة متعددة الألوان تستخدم أصباغاً متعددة لتلطيخ مختلف مكونات الخلية، وتتكون من ثلاثة أصباغ رئيسية هي الهيماتوكسيلين والأيوسين والصبغة البرتقالية الخضراء 6، وقد طورها جورج بابانيكولاو، وتُعرف هذه الصبغة ببقعة عنق الرحم.

مكونات صبغة بابانيكولاو

تتكون صبغة بابانيكولاو من ثلاثة أصباغ رئيسية، وهي:

1- الهيماتوكسيلين

• إن الهيماتوكسيلين صبغة طبيعية، وتقوم بتلطيخ نواة الخلية باللون الأزرق، وترتبط هذه الصبغة بمجموعات الحمض النووي الكبريتية.

• يوجد لها أنواع عديدة مثل الهيماتوكسيلين هاريس (Harris’ hematoxylin) والهيماتوكسيلين جيلز (Gills’ hematoxylin)، وتعد الهيماتوكسيلين هاريس الأكثر استخداماً، ويتم استخدامها في صبغة بابانيكولاو.

• يتطلب تحضير الهيماتوكسيلين هارتس استخدام العديد من المكونات وهي: الهيماتوكسيلين والإيثانول وكبريتات الألومنيوم والبوتاسيوم والماء المقطر وأكسيد الزئبق وحمض الخليك الجليدي.

2- الأيوسين أزور

• إن الأيوسين أزور مزيج من الأيوسين Y والأخضر الفاتح SF وبني بسمارك (Bismarck brown Y).

• يقوم الأيوسين Yبتلطيخ السيتوبلازم للخلايا الحرشفية الناضجة والنواة وخلايا الدم الحمراء والأهداب الوردية.

• إن من أكثر الأصباغ الأيوسين شائعة الإستخدام هي EA 31 و EA 50 و EA 65.

• يقوم  اللون الأخضر الفاتح SF بتلوين سيتوبلازم الخلايا النشطة مثل الخلايا العمودية والخلايا الحرشفية المكافئة والخلايا الحرشفية الوسيطة باللون الأزرق.

• لا يقوم اللون البني بسمارك بتلوين أي شيء، وأحياناً يتم حذفه.

• يتطلب تحضير الأيوسين أزور استخدام EA 50 و والأخضر الفاتح SF والأيوسين Y وحمض الفوسفوتونجستيك والكحول والميثانول وحمض الخليك الجليدي.

3- الصبغة البرتقالية الخضراء 6

• إن هذه الصبغة صبغة حامضية تلطخ السيتوبلازم للخلايا الكيراتينية الناضجة، وتلون المكونات باللون البرتقالي بكثافة متفاوتة.

• يتطلب تحضير الصبغة البرتقالية الخضراء 6 استخدام اللون البرتقالي المخضر (Orange G) والكحول وحمض الفوسفوتونجستيك.

خصائص صبغة بابانيكولاو

تمتلك صبغة بابانيكولاو العديد من الخصائص، وهذه الخصائص هي:

• إن صبغة بابانيكولاو هي تقنية يتم فيها استخدام العديد من الألوان  لتلطيخ الخلايا وتلوينها، وسميت على اسم العالم جورج بابانيكولاو الذي طورها في عام 1942.

• تُعرف صبغة بابانيكولاو باسم بقعة عنق الرحم، ويُعرف عملية إجراء البقعة باسم مسحة عنق الرحم.

• كما يمكن استخدام صبغة بابانيكولاو في الطيخ العديد من العينات مثل عينة البلغم والبول والسائل النخاعي والسائل البطني وخزعات الورم  وشفط الإبرة الدقيقة والسوائل الجنبية، ومسحات عنق الرحم.

• تستخدم صبغة بابانيكولاو كلاً من الأصباغ الأساسية والحمضية؛ بحيث تلطخ الصبغة الأساسية المكونات الحمضية للخلية، بينما تلطخ الأصباغ الحمضية المكونات الأساسية للخلايا.

• تعتمد عملية التلطيخ بهذه الصبغة على الشحنات الأيونية لمكونات الخلية مع مبدأ الجذب والتنافر للأيونات والأصباغ.

• تكمن أهمية هذه الصبغة في تحديد نواة الخلية للمساعدة في تحديد التشوهات النووية للخلايا السرطانية، وتلطيخ السيتوبلازم، وللتمييز والتعرف على أنواع معينة من الخلايا مثل الخلايا الحمضية والخلايا القاعدية.

استخدامات صبغة بابانيكولاو

يتم استخدام صبغة بابانيكولاو في العديد من الفحوصات للكشف عن الأمراض، فهي تستخدم في:

• تستخدم صبغة بابانيكولاو في مسحة عنق الرحم أو فحص عنق الرحم؛ للكشف عن العديد من الأمراض المتعلقة في الجهاز التناسلي الأنثوي مثل سرطان عنق الرحم أو التهابه.

• تستخدم صبغة بابانيكولاو في فحص خلايا الكبد؛ للكشف عن سرطان الكبد (المايلوما).

• تستخدم صبغة بابانيكولاو في فحص الغدة الدرقية؛ للكشف عن سرطان الغدة الدرقية.

• تستخدم صبغة بابانيكولاو في في فحص أورام الخلايا، وللتمييز بين الأورام الحميدة والخبيثة.

• تستخدم صبغة بابانيكولاو في تحديد وتشخيص العديد من مسببات الأمراض كالبكتيريا مثل بكتيريا المتدثرة الحثرية، والفطريات مثل المبيضات، والطفيليات مثل الأميبا الفموية و بعض أنواع ديدان السيستودا مثل الديدان المشوكية الحبيبية.

خطوات التلطيخ بصبغة بابانيكولاو

يمكن تلطيخ عينة ما بصبغة بابانيكولاو باتباع الخطوات التالية:

• يتم غسل العينة بإيثانول 95٪ لمدة 15 دقيقة، ثم يتم غسلها بماء الصنبور.

• يتم إضافة الهيماتوكسيلين هارتس لمدة من 1-3 دقائق، ثم يتم غسل العينة بماء الصنبور، ثم تُغمس العينة في 95٪ من الإيثانول عشر مرات.

• يتم إضافة صبغة البرتقال G-6 لمدة 1.5 دقيقة، ثم تُغمس العينة في 95٪ من الإيثانول عشر مرات.

• يتم إضافة صبغة الأيوسين آزور لمدة 2.5 دقيقة، ثم تُغمس العينة في 95٪ من الإيثانول عشر مرات.

• في النهاية يتم إضافة 100٪ من الإيثانول لمدة 1 دقيقة، ثم يتم رؤية العينة تحت الميكروسكوب.

نتيجة التلطيخ بصبغة بابانيكولاو

ينتج عن التلطيخ بصبغة بابانيكولاو ما يلي:

• نواة الخلية: تكون ذات لون أزرق.

• الخلايا الحامضية (Acidophilic cells): تكون ذات لون أحمر.

• الخلايا القاعدية (Basophilic cells): تكون ذات لون أزرق-أخضر.

• الخلايا المتعادلة (Eosinophilic cells): تكون ذات لون برتقالي-أحمر.

• خلايا الدم الحمراء: تكون ذات برتقالي-أحمر إلى وردي غامق.

• الكيراتين: يكون ذات لون برتقالي-أحمر.

• الخلايا السطحية (Superficial cells): تكون ذات لون وردي.

• الخلايا المتوسطة والباراباسال (Intermediate and Parabasal Cells): تكون ذات لون أزرق-أخضر.

• خلايا الميتابلاستيك (Metaplastic cells): قد تحتوي على كل من الأزرق والأخضر والوردي.

• فطر المبيضات: تكون ذات لون أحمر.

• بكتيريا المتدثرة الحثرية: تكون ذات لون رمادي وأخضر.

• الأميبا الفموية: تكون ذات لون أزرق مخضر.