ما هي صبغة زيل نيلسن

صبغة زيل نيلسن (Ziehl–Neelsen staining): هي تقنية أو طريقة تلطيخ مخبرية مهمة في علم الأحياء الدقيقة، والتي تُستخدم لتصنيف أنواع البكتيريا التي لا تُلطخ بصبغات بسيطة أو صبغة غرام مثل بكتيريا السل، كما أنها تُستخدم لتلطيخ أنواع الفطريات المختلفة وبعض الطفيليات الأولية، وقد سميت بهذا الاسم نسبة إلى عالم البكتيريا فرانز زيل  وعالم الأمراض فريدريك نيلسن.

مكونات صبغة زيل نيلسن

تتكون طريقة أو صبغة زيل نيلسن من المكونات التالية:

1- الكاربول فوشين

• الكاربول فوشين (Carbol fuchsin): هو مزيج من الفينول والفوشين الأساسي الذي يستخدم في إجراءات تلوين البكتيريا، وكما يُستخدم في تلوين أنواع الفطريات المختلفة وبعض الأوليات.

• يستخدم الكاربول فوشين كصبغة أولية ذات لون أحمر في طريقة زيل نيلسن للكشف عن البكتيريا المقاومة للحمض؛ لأنه أكثر قابلية للذوبان في دهون جدار الخلايا مقارنة بالصبغات الأخرى.

2- مزيل اللون

• يتم استخدام الكحول الحمضي كمزيل للون في صبغة زيل نيلسن.

• الكحول الحمضي (Acid Alcohol): هو عبارة عن محلول مكون حمض الهيدروكلوريك بنسبة 1٪ أو 0.5٪ في 70٪ كحول أو 95٪ إيثانول.

• يقوم الكحول الحمضي بإزالة الكاربول فوشين من سيتوبلازم الخلية، والحفاظ  على تلطيخه للنواة.

3- الميثلين الأزرق

• الميثلين الأزرق (Methylene blue): هو ملح مكون من مركب كلوريد الميثيلثيونينيوم، ويستخدم كصبغة وكدواء، ويتواجد بشكل سائل ذو لون أزرق، وبشكل صلب ذو لون أخضر.

• يتم استخدام الميثلين الأزرق كآخر خطوة في صبغة زيل نيلسن.

خصائص صبغة زيل نيلسن

تمتلك صبغة زيل نيلسن العديد من الخصائص، وهذه الخصائص:

• إن صبغة زيل نيلسن صبغة تفاضلية (Differential stain)، لأنها تميز بين أنواع عديدة من الأحياء الدقيقة، وليست فقط البكتيريا.

• تم تطوير صبغة زيل نيلسن من قبل عالم البكتيريا فرانز زيل وعالم الأمراض فريدريك نيلسن.

• تعتمد صبغة زيل نيلسن على الجدار الخلوي لخلية الكائن المجهري، فإذا كان الجدار الخلوي للخلية يتكون من طبقة دهنية شمعية سمكية، فإن الخلايا تسمى خلايا مقاومة للأحماض، وذلك لعدم قدرة دخول الكحول الحمضي إلى داخلها.

• تُعتبر خلايا الفطريات مثل الهيستوبلازما (Histoplasma) وبعض أنواع الاوليات مثل الكريبتوسبوريديوم وطفيل البوغي الحلقي وطفيل المتماثل البوغي مقاومة للأحماض، فتتلون باللون الأحمر.

• إن من أهم أنواع البكتيريا التي تكون خلاياها مقاومة للأحماض هما: الميكروبكتيريوم (Mycobacteria) و(Nocardia)، وهذه الأنواع هي أنواع بكتيرية موجبة غرام إذا تم تلطيخها بصبغة غرام.

• تُلطخ بكتيريا سالبة غرام باللون الأحمر بصبغة زيل نيلسن.

آلية عمل صبغة زيل نيلسن

تقسم الخلايا في صبغة زيل نيلسن إلى:

• الخلايا المقاومة للأحماض: يقوم الكاربول فوشين بتلوين جدار الخلية، وعند تعريض العينة للحرارة، تُذاب المادة الدهنية الشمعية السميكة في جدار الخلية البكتيرية أو الفطرية. هذا يسمح للكاربول فوشين بالتغلغل داخل الخلية وتلوينها بالكامل، فتظهر باللون الأحمر. وعندما يُضاف الكحول الحمضي، لا يتمكن من إزالة صبغة الكاربول فوشين، مما يجعل الخلية تحتفظ بلونها الأحمر. وعند تطبيق صبغة الميثلين الأزرق، لا تتمكن من الدخول إلى داخل الخلية، فتظل الخلية محتفظة بلونها الأحمر..

• الخلايا غير المقاومة للأحماض: يقوم الكاربول فوشين بتلوين جدار الخلية، لكنه لا يستطيع التغلغل داخلها بسبب تركيبة الجدار الخلوي. بعد ذلك، يقوم الكحول الحمضي بإزالة صبغة الكاربول فوشين من جدار الخلايا، مما يجعلها شفافة. وعند تطبيق صبغة الميثلين الأزرق، تُلوَّن الخلية بالكامل وتصبح ذات لون أزرق.

كيفية إجراء صبغة زيل نيلسن

يتم إجراء صبغة زيل نيلسن بالخطوات التالية:

• يتم تحضير عينة ما، وتركها تجف بالهواء  الجاف، ثم عمل تثبيت لها بالحرارة.

• تُلطخ العينة بالكاربول فوشين، ويتم تحريك البقعة بشكل دائري، ثميتم وضع منديل ورقي فوق الشريحة لتشبع الصبغة به، ثم ترك العينة لتجف بالحرارة لمدة دقيقتين.

• يتم غسل العينة بالماء المعقم، ثم وضع الكحول الحمضي، وتركه من 15-20 ثانية.

• يتم وضع الميثلين الأزرق  على الشريحة، ثم تركه لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة، ثم يتم وضع منديل ورقي على الشريحة لتشبع الصبغة به.

• يتم غسل الشريحة بالماء المعقم، ثم يتم رؤية العينة تحت المجهر.

نتيجة صبغة زيل نيلسن

تكون نتيجة صبغة زيل نيلسن على النحو الآتي:

• إذا كانت خلية البكتيريا مقاومة للأحماض فإنها تُلطخ بصبغة الكاربول فوشين وباللون الأحمر في صبغة زيل نيلسن.

• إذا كانت خلية البكتيريا غير مقاومة للأحماض فإنها تُلطخ بالميثلين الأزرق وباللون الأزرق في صبغة زيل نيلسن.