اقرأ في هذا المقال
فحص ELISA أو الأليزا (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay): هو اختبار مناعي كيميائي مخبري تحليلي، يُستخدم لاكتشاف وقياس المواد القابلة للذوبان في الخلية أو مصل الدم مثل الأجسام المضادة والأجسام المستضادة، والبروتينات أو البروتينات السكرية والهرمونات، والتي تكون موجودة في العينات البيولوجية، للكشف عن العديد من الأمراض ومسبباتها مثل البكتيريا والفيروسات وغيرها.
مبدأ فحص ELISA
يكون مبدأ فحص ELISA على النحو الآتي:
- يقوم فحص ELISA بفصل بعض مكونات خليط التفاعل، وذلك عن طريق امتصاص مكونات معينة على الطور الصلب.
- تُضاف العينة السائلة إلى طور صلب ثابت بخصائص ارتباط خاصة، ويتبعها كواشف سائلة متعددة تُضاف على نحو متسلسل وتحتضن وتُغسل، متبوعة ببعض التغيير البصري في السائل النهائي في البئر التي تُقاس منها كمية المادة التحليلية.
- تعتمد قراءة فحص ELISA على كمية المادة التحليلية، ويتم ذلك من خلال الكشف عن شدة الضوء المرسل عن طريق قياس الأطياف، ويتضمن هذا التقدير الكمي لنقل بعض الأطوال الموجية المحددة للضوء عبر السائل للماد التحليلية، وتعتمد حساسية الكشف في فحص ELISA على تضخيم الإشارة أثناء التفاعلات التحليلية، ويتم إنشاء هذه الإشارة من خلال إنزيمات مرتبطة بالكواشف.
مكونات فحص ELISA
يتكون فحص ELISA بشكل عام من:
- المادة التحليلية: وتسمى بالمادة الرابطة؛ لأنها سترتبط بكاشف الكشف، وبالتالي فإن ELISA تندرج تحت الفئة الأكبر من فحوصات الربط.
- كاشف الارتباط الخاص بالرابط: ويكون مثبت، ويتم تغطيته وتجفيفه.
- الركيزة الصلبة: وهي عبارة عن لوحة متعددة الآبار، وتُعرف باسم لوحة ELISA.
طرق فحص ELISA
يتم فحص ELISA عن طريق:
- الكشف الرطب: الكشف عن المادة المحددة التي يتم تحليل وجودها كمياً أو نوعياً في عينة سائلة، وذلك عن طريق استخدام الكواشف السائلة أثناء التحليل مثل التسلسل المتحكم للتفاعلات البيوكيميائية، والتي ستولد إشارة يمكن قياسها كمياً بسهولة وتفسيرها كمقياس لكمية المادة التحليلية في العينة، والتي تظل سائلة وتبقى داخل غرفة التفاعل أو ضرورية للاحتفاظ بالمواد المتفاعلة محتواه.
- الكشف الجاف: يتم الكشف عن المادة المحددة، وذلك عن طريق استخدام الشرائط الجافة، والتي تتضمن قراءة شريط جاف بواسطة طرق مثل قياس الانعكاس، ولا تحتاج إلى غرفة احتواء تفاعل لمنع الانسكاب أو الاختلاط بين العينات.
أنواع فحص ELISA
يوجد أربعة أنواع من فحص ELISA، وهي:
- فحص ELISA المباشر (Direct ELISA): يتم هذا النوع من خلال تجميد الجسم المستضد على سطح اللوحة متعددة الآبار، ويتم كشفه بجسم مضاد خاص بمولد الضد، فيرتبط الجسم المضاد مباشرة بـ HRP أو جزيئات الكشف الأخرى.
- فحص ELISA غير المباشر (Indirect ELISA): ويتم هذا النوع من خلال استخدام خطوتين للكشف، حيث يرتبط الجسم المضاد الأولي المحدد لمولد الضد بالهدف، والجسم المضاد الثانوي المسمى ضد الأنواع المضيفة للجسم المضاد الأولي يرتبط بالجسم المضاد الأولي للكشف، ويمكن استخدام طريقة للكشف عن أجسام مضادة محددة في عينة مصل عن طريق استبدال المصل بالجسم المضاد الأولي.
- فحص ELISA الساندوتشي (Sandwich ELISA): ويتطلب هذا النوع من الفحص نوعين من الأجسام المضادة الخاصة، والتي تكون متواجدة بحلقات مختلفة من الجسم المستضد، ويشار إلى هذين باسم أزواج الأجسام المضادة المتطابقة، ويتم طلاء أحد الأجسام المضادة على سطح اللوحة متعددة الآبار، ويستخدم كجسم مضاد للقبض لتسهيل تجميد مولد الضد. الجسم المضاد الآخر مترافق ويسهل اكتشاف المستضد.
- فحص ELISA التنافسي (Competitive ELISA): ويتم هذا الفحص من خلال حدوث تنافس بين مستضد العينة مع مستضد مرجعي، وذلك للارتباط بكمية محددة من الجسم المضاد المسمى، ثم يتم تغليف المستضد المرجعي على صفيحة متعددة الآبار، ويتم تحضين العينة باستخدام الجسم المضاد المسمى وإضافته إلى الآبار، واعتماداً على كمية المستضد في العينة، ستتوفر أجسام مضادة أكثر أو أقل لربط المستضد المرجعي.
أشكال فحص ELISA
يتوفر العديد من أشكال من فحص ELISA، والتي توجد على شكل كيت (Kit)، وهي:
- كيت فحص ELISA المغلف أو المطلي (Coated ELISA kits): ويحتوي على ألواح من الأجسام المضادة المغلفة، وأجسام مضادة للكشف، ومخازن ومخففات ومعايير وركائز.
- كيت فحص ELISA غير المغلف أو المطلي (Uncoated ELISA kits): وتكون هذه الكيتات مجموعة مع جميع الكواشف اللازمة لطلاء اللوحة الخاصة الفحص، ولتشغيل الفحص باستثناء محلول الإيقاف ومخزن الغسيل.
- كيت فحص ELISA التقليدية (Traditional ELISA kits): ويتكون من لوحات مجموعة ELISA الفورية، والتي تحتوي على جميع المكونات الضرورية بما في ذلك الأجسام المضادة للالتقاط والجسم المضاد للكشف بالتجميد، والستربتافيدين- HRP، ومخفف العينة، وآبار الشريط التي تحتوي على معيار المنحنى القياسي بشكل منفصل للسماح بالاستخدام الكامل لـ 96 بئراً لعينات الفحص.
- كيتات أزواج الأجسام المضادة (Antibody pair kits): وتحتوي على أجسام مضادة متطابقة محسّنة لتطوير ومعايير فحص ELISA، والتي تكون بدون ألواح أو كواشف كشف.
استخدامات فحص ELISA
يُستخدم فحص ELISA في العديد الاستخدامات، وهي:
- يُستخدم فحص ELISA في الكشف عن الجسم المضاد في الدم للعديد من الفيروسات، مثل فيروس نقص المناعة البشرية وفيروس غرب النيل وفيروس كورونا SARS-CoV-2 غيره.
- يُستخدم في الكشف عن العديد من البكتيريا المسبب للأمراض مثل بكتيريا البوريليا المسببة لمرض لايم.
- يُستخدم فحص ELISA في الكشف عن العديد من الطفيليات مثل البلازموديوم المسبب لمرض الملاريا، والمثقبيات السوطية المسببة لمرض شاغاس.
- يُستخدم فحص ELISA في الكشف عن مسببات الحساسية الغذائية المحتملة، مثل الحليب والفول السوداني والجوز واللوز والبيض.
- يُستخدم فحص ELISA في الكشف عن الأمراض والاضطرابات الهضمية.
- يُستخدم فحص ELISA في علم السموم كشاشة افتراضية سريعة لفئات معينة من الأدوية.
