فحوصات مخبرية بيوكيميائية للتمييز بين أنواع Streptococci

أهم الطرق المخبرية للتعرف على الكائنات الحية الدقيقة:

يتبع مختبر الأحياء الدقيقة السريري العديد من الطرق المخبرية للتعرف على الكائنات الحية الدقيقة بأنواعها المختلفة من ناحية معرفة العمليات الأيضية الخاصة بها ومعرفة طرق النمو وتكاثر والانتشار، وذلك لسهولة الوصول إلى التشخيص السريري المناسب للعديد من الأمراض والتهابات التي تسببها العديد من الكائنات الحية الدقيقة، كما يقوم مختبر الأحياء الدقيقة السريري على تميز بين أنواع الكائنات الحية الدقيقة ضمن النوع الواحد وخاصة البكتيريا.

حيث إنه تتشابه العديد من أنواع البكتيريا ضمن النوع الواحد بالعلامات السريرية على المريض لكن تختلف هذه الأنواع بطرق علاجها وأيضاً تختلف في حساسيتها للمضادات الحيوية المستخدمة في العلاج، لذا لا بد من فحوصات بيوكيميائية مخبرية أو طرق مخبرية لتميز بين هذه الأنواع حتى نتمكن من سهولة العلاج.

ما هي بكتيريا Streptococci؟

تعد بكتيريا (Streptococci) من أهم أنواع البكتيريا موجبة الجرام، لديها العديد من الأنواع منها ما هو ممرض ومنها لا يسبب أي أعراض وعلامات سريرية على المريض، من أهم أنواع هذه البكتيريا الممرضة (Streptococcus pyogenes) و (Streptococcus pneumoniae) وأيضاً (Streptococcus agalactiae) حيث تم اعتماد في تصنيف هذه البكتيريا إلى هذه الأنواع على ما يلي:

• اختلاف التفاعلات البيوكيمائية الكيميائية لكل منها.

• اختلاف في حساسية للمضادات الحيوية المستخدمة في مختبر الأحياء الدقيقة السريري.

• اختلاف في أشكال نمو المستعمرات البكتيرية لكل منها على أنواع الميديا المختلفة وخاصة (blood ager).

• علم الوارثة الجزئي (Molecular genetics) لكل منها مختلف.

• اختلاف في أنماط  التحلل (hemolysis pattern) عند نموها وتكاثر على (blood ager)، وتختلف أنماط التحلل على هذه الميديا بسبب اختلاف ووجود أنزيمات التحلل عند أنواع مختلفة من هذه البكتيريا.

1- بكتيريا Streptococcus pyogenes:

• يطلق عليها اسم آخر (Group A streptococci).

• تمتلك العديد من البروتينات القادرة من خلالها على الارتباط والالتصاق بالخلايا والأنسجة، مما يؤدي إلى قدرتها العالية على تسبب الأمراض والتهابات للأنسجة والخلايا.

• لديها القدرة على إفراز الأنزيمات الممرضة في الخلايا والأنسجة مما يؤدي إلى قدرتها العالية إلى تشكل الأمراض مثل التهاب البلعوم الشديد، استجابات شديدة في جهاز المناعة، والتهابات عديدة، وأيضاً تسبب (toxic shock syndrome).

• لديها القدرة على إفراز بعض السموم داخل وخارج الخلايا والأنسجة، مما يؤدي إلى تشكيل بعض الأمراض مثل تحلل خلايا الدم الحمراء أو الصفائح الدموية.

• أهم الأمراض مسؤولة عنها هذه البكتيريا التهاب البلعوم أو الحلق، وقد ينتشر هذا الالتهاب إلى الجهاز التنفسي أو التهاب المسالك التنفسية العلوية أو السفلية التي قد تؤدي إلى التهاب في الأذن الوسطى أو الجيوب التهاب الجيوب الأنفية الالتهاب الرئوي، وأيضاً تقيح الجلد حيث تكون عبارة عن التهاب طبقات الجلد السطحية مما يؤدي إلى ندبات قيحيه وتكون هذه الحالة منتشرة عند الأطفال بشكل خاص، ومن الأمراض التي تسببها هذه البكتيريا أيضاً التهابات خلوية في الأنسجة وقد تتفاقم هذه المشكلة مما يؤدي إلى موت الأنسجة والخلايا، بالإضافة إلى أنها قد تؤدي إلى حالات من تسمم الدم.

• أشهر العينات الخاصة بهذه البكتيريا مسحة من الحلق أو البلعوم، مسحة الأذن، مسحات من جلد أو من ندبات قيحيه، خزعات من أنسجة معينة، عينات من الدم.

2- بكتيريا Streptococcus agalactiae:

• يطلق عليها اسم آخر (group B streptococci).

• توجد هذه البكتيريا بشكل طبيعي (normal flora) في أسفل الجهاز الهضمي والمهبل عند النساء.

• تمكن خطورة هذه البكتيريا أثناء الولادة الطبيعية لدى النساء، بسبب انتقالها من المهبل إلى الجنين أثناء الولادة مما تؤدي إلى العديد من المشاكل لدى الجنين مثل التهاب السحايا أو التهاب رئوي حاد أو تسمم الدم بعد حوالي من شهرين إلى ثلاثة شهور بعد الولادة.

• قد تؤدي هذه البكتيريا إلى التهاب سحايا لدى البالغين لكن ضمن احتمالات  قليلة.

• قد تسبب مشاكل في الجلد والتهابات في طبقات الجلد.

• من أشهر العينات الخاصة بهذا النوع من البكتيريا، عينة سائل النخاع الشوكي (CSF)، عينات من الدم، البلغم، مسحات من الجلد، عينات من البول.

3- بكتيريا Streptococcus pneumoniae:

• تسبب العديد من الأمراض لدى الإنسان منها التهابات في جهاز التنفسي، والاحتقان الرئوي، والتهابات في عضلات القلب، فشل في عمل الحويصلات الهوائية، تأثير سلبي في الاستجابات جهاز المناعة.

• من أشهر العينات الخاصة بهذا النوع من البكتيريا، عينات الدم أو البلغم.

طرق وفحوصات مخبرية بيوكيميائية للتمييز بين أنواع Streptococci:

1- فحص CATALASE TEST:

يعد هذا الفحص إحدى فحوصات البيوكيميائية، حيث تظهر نتيجة الفحص بشكل ملاحظ وسريع وتكون النتيجة على شكل فقاعات لكن هذا الفحص يستخدم لتميز بين أنواع البكتيريا من (Staphylococcus) وبين (Streptococcus)، بحيث أنه تكون نتيجة الفحص إيجابية لبكتيريا (Staphylococcus) في حين تكون سلبية لأنواع البكتيريا (Streptococcus)، حيث إنه يقوم مبدأ عمل الفحص كما يلي:

• ارتداء الكمامات والقفازات، وتعقيم مساحة العمل باستخدام المطهرات قبل البدء بالعمل.

• ضع كمية صغيرة من مستعمرة البكتيريا على شريحة معقمة.

• إضافة ثلاثة قطرات من كاشف (H2O2) على الشريحة.

• مزج مستعمرة البكتيريا مع (H2O2) باستخدام قطعة خشبية وليس قطعة معدنية.

• ملاحظة النتيجة بظهور الفقاعات أو انعدام وجودها خلال دقيقتين من المزج.

• التخلص من الشريحة في حاوية النفايات الطبية، وتعقيم مساحة العمل باستخدام المطهرات لتجنب التلوث.

2- أنماط نمو المستعمرات على Blood ager:

يستخدم (blood ager) لدعم نمو وتكاثر أنواع البكتيريا (streptococcus spp)، لكن تختلف مظاهر النمو بسبب اختلاف أنماط  العوامل التحلل لديها، ويظهر هذا الانحلال على عدة أنماط:

• انحلال الدم بيتا (Beta hemolysis): تعمل الإنزيمات البكتيرية على تحليل خلايا الدم الموجودة في (blood ager) تمامًا، مما ينتج عنه منطقة واضحة وفارغة حول المستعمرة، ويظهر هذا النمط في نوع البكتيريا (Streptococcus pyogenes).

• انحلال الدم ألفا (Alpha hemolysis): تعمل الإنزيمات البكتيرية على تحلل الجزئي وغير المكتمل لخلايا الدم الموجودة في (blood ager) مما ينتج عنها تغير اللون حول المستعمرة البكتيرية إلى الون الأخضر، ويكون هذا النمط بشكل واضح في نوع البكتيريا (Streptococcus agalactiae).

• انحلال الدم جاما (Gamma hemolysis): لا تتأثر خلايا الدم الحمراء الموجودة في (blood ager)في أي نوع من الإنزيمات، بالتالي تبقى الميديا كما هي ويظهر هذا النمط بشكل واضح في البكتيريا من النوع(Streptococcus pneumoniae) .

3- اختبار الحساسية للمضادات الحيوية:

يتم استخدام اختبار الحساسية للمضادات الحيوية لتميز بين أنواع (streptococcus spp)، وقد تختلف بعض المضادات الحيوية المستخدمة بين المختبر والآخر، وتختلف أنواع (streptococcus spp) لمدى مقاومتها وحساسيتها لمضادات حيوية معينة وعلى هذا الأساس يتم اعتماد هذه المضادات، ومن المضادات الحيوية الأكثر شيوعاً التي تستخدم لتميز بينها (Ethyl hydrocupreine hydrochloride).